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3.生物信息学分析，AZ处理相关环状RNA的功能预测 2013年两篇Nature文章揭示环状RNA具有miRNA海绵的功能，它可以吸附miRNA来调节相关基因的表达。此后，环状RNA的ceRNA功能机制正被人们广fan研究。研究人员通过生物信息学预测，发现282条AZ相关差异表达的环状RNA含有miRNA的结合位点，每个环状RNA的结合位点数从1到21不等。基于这些数据，研究人员根据它们的结合能力选出了5个miRNA。 然后他们随机选择了5个差异下调的环状RNA，并使用前5个预测的miRNA构建了circRNA-miRNA网络。可以看出每个环状RNA有多个miRNA结合位点，且一些环状RNA与同一miRNA的结合位点是相同的，暗示着环状RNA彼此之间的竞争性与miRNA结合。以上结果表明非洲爪蟾体内环状RNA可能存在的miRNA的海绵功能。m6A环状RNA测序，云序生物提供成熟m6A RNA甲基化MeRIP-seq服务。天津m6a环状平台

作为一种普遍存在于各类真核生物中的新型非编码RNA，环状RNA逐渐成为了当下热门的明星分子。由于环状RNA研究刚刚起步，已经进行过环状RNA研究的物种数量还非常有限。因此，对新物种的环状RNA表达谱进行系统性研究就成为了发表SCI文章的一条捷径。云序生物客户发表的这项成果是全世界first篇对小麦环状RNA进行系统性研究的文章，也为广大研究人员提供了一个非常好的模板，即：如何简单地通过环状RNA测序，环状RNA定量PCR和生物信息学分析，在不进行功能和分子机制研究的情况下，短平快的发表一篇影响因子不错的文章，非常具有借鉴意义。山东环状pri-miRNA测序1993年在小鼠精子决定基因Sry中发现环状转录。

鸡白血病病毒亚群（ALV-J）是一类逆转录病毒，该病毒会引起一种重要的感ran性疾病。患病的家禽会导致产蛋率的下降，大面积影响到家禽养殖产业。感ranALV-J的鸡免疫系统会受到严重的抑制并引起多种tumour疾病从而产生很高的死亡率，目前还不能通过接种疫苗的方式来防御这种疾病。来自华南农业大学广东省重点实验室的研究团队通过环状RNA测序的方式研究了病毒抗性与病毒易感的鸡肝脏组织当中环状RNA的表达，发现了32个差异表达的环状分子，其中12个在ALV-J抗性样本中表达量明显升高，而20个在易感样本中表达量更高，而生信预测表明这些环状RNA分子能够调控免疫分子通路的信息传递从而改变生物体的抵抗力。

作为明星分子，环状RNA的热度与日俱增。环状RNA到底火到了什么程度？从云序客户捷报频传﹑研究成果不断就可见一斑：上期我们刚刚介绍云序客户发表了世界小鼠脑创伤模型外泌体环状RNA的研究，整合了外泌体和环状RNA两大科研热点。在探索新物种的环状RNA研究上，云序客户此前更是先后发表了全世界first斑马鱼环状RNA、first篇小麦环状RNA和first篇鸡环状RNA文章，如今首篇非洲爪蟾的环状RNA文章新鲜出炉了！这一成果今年年初发表在《Chemosphere》（影响因子4.2）上！云序生物对m6A RNA-seq实验每一步骤均设有关键质控。

3.2 RNA pull-down+MS/WB/qPCR/RNA-Seq 设计目标RNA生物探针把相应的结合蛋白质与RNA复合物沉淀下来，蛋白质谱检测或WB检测与RNA结合的蛋白。设计目标RNA生物探针把相应的结合蛋白质与RNA复合物沉淀下来，qPCR检测或RNA-seq检测与RNA结合的RNA。 3.3 双荧光素酶报告实验 双荧光素酶报告实验检测两个基因之间的互作。 3.4 病毒液以及siRNA设计 提供circRNA过表达以及干扰慢病毒，腺病毒以及设计siRNA。 四、CircRNA修饰研究 4.1m6A/m5C/ac4C/m7G/m1A等修饰 针对环状RNA各类修饰进行高通量筛选。 4.2 MeRIP-circRNA-PCR验证 对高通量测序的结果，通过qPCR进行进一步验证。circRNA与白血病、恶性胶质liu、胃ai、肝ai等疾病的发生、发展密切关联。湖北研究环状

环状RNA pull down体外转录法标记生物素RNA探针，然后与胞浆蛋白提取液孵育，形成RNA-蛋白质复合物。天津m6a环状平台

2.环状RNA定量PCR及RNase R耐受实验，验证环状RNA的表达和结构 为了验证测序结果的准确性，研究人员随机选取了8条差异表达的环状RNA，利用“divergent primers”进行环状RNA定量PCR检测和RNase R耐受性实验。所有环状RNA的表达都能够被定量PCR实验检测到，并且定量PCR结果与测序结果趋势一致，表明环状RNA测序结果准确性非常高。所有环状RNA都能抵抗RNase R的消化，进一步证实了这些RNA的环形结构。云序生物作为国内早期提供环状RNA测序的测序公司，自行建立的环状RNA数据库circDB，借物种覆盖广、数据量大、疾病背景多的特点为客户提供好的服务。天津m6a环状平台

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