北京ac4c环状RNA实时定量PCR

3.2 RNA pull-down+MS/WB/qPCR/RNA-Seq 设计目标RNA生物探针把相应的结合蛋白质与RNA复合物沉淀下来，蛋白质谱检测或WB检测与RNA结合的蛋白。设计目标RNA生物探针把相应的结合蛋白质与RNA复合物沉淀下来，qPCR检测或RNA-seq检测与RNA结合的RNA。 3.3 双荧光素酶报告实验 双荧光素酶报告实验检测两个基因之间的互作。 3.4 病毒液以及siRNA设计 提供circRNA过表达以及干扰慢病毒，腺病毒以及设计siRNA。 四、CircRNA修饰研究 4.1m6A/m5C/ac4C/m7G/m1A等修饰 针对环状RNA各类修饰进行高通量筛选。 4.2 MeRIP-circRNA-PCR验证 对高通量测序的结果，通过qPCR进行进一步验证。m6A是真核生物mRNA上常见的一种转录后修饰。北京ac4c环状RNA实时定量PCR

研究思路： 本文首先基于高通量手段比较了小鼠中LT-HSC，ST-HSC和MPPs中全转录组变化，共发现156种明显性差异表达的circRNAs。表达量验证证实9个circRNA在LT-HSC中明显性上调。在细胞表型层面，发现只有干扰D430042O09Rik转录的circRNA——Cia-cGAS后，可明显改变造血干细胞的亚群分布，作者因此锚定Cia-cGAS进行机制分析。作者通过Cas-9基因敲除策略成功构建了Cia-cGAS基因敲除小鼠，在Cia-cGAS基因敲除小鼠中LT-HSC明显性减少，I型IFN表达升高。通过RNA Pull-down实验，作者发现Cia-cGAS可以与cGAS结合，cGAS-RIP实验反向证实二者之间具有直接的相互作用。后续，作者通过生信预测结合EMSA实验分析了Cia-cGAS与cGAS相互作用的位点信息。酶学研究证明，Cia-cGAS可通过结合cGAS并抑制其活性。云南m7G环状研究m6A环状RNA测序，云序生物提供成熟m6A RNA甲基化MeRIP-seq服务。

胶质瘤作为较常见的颅内恶性tumour占颅脑tumour的40%~50%，电磁辐射等其他环境致cancer因素会导致胶质瘤的发生，尽管手术切除、术后放疗、药物化疗等方法可以作为主流的胶质瘤医治手段，但是多形性胶质母细胞瘤（GBM）的强侵袭、增殖能力仍给病人的医治造成很大的困难。上海第二军医大学附属长征医院研究者通过环状RNA测序，从环状RNA角度对胶质瘤的发生和发展进行了研究， 共发现206个上调环状和1205个下调环状，其中扩大样本量qPCR验证（13例正常、68例疾病）后将目标锁定在circBRAF。该环状转录自BRAF基因，虽然在正常人样本当中BRAF基因编码的环状cricBRAF分子mRNA分子水平无明显差异，但是在疾病样本当中circBRAF有明显上调，KM曲线结合临床资料表明该环状的高表达能一定程度上预示着疾病的恶性程度和预后情况。

河南农业大学的研究团队利用云序生物提供的环状RNA测序服务，在小麦幼苗叶片中鉴定出大约88个环状RNA分子，而在脱水胁迫幼苗中有62个环状RNA分子存在差异表达。在脱水反应的环状RNA分子中，有6个在小麦中作为26个相应的miRNA的海绵。利用qPCR验证16个环状RNA，包括6个miRNA海绵和10个随机选择的环状RNA, 其中14个环状RNA与测序结果趋势一致，反应测序数据的真实性可靠性。GO分析和KEGG分析揭示circRNAs潜在的生物学功能，例如所涉及的参与脱水反应过程，如光合作用，叶绿素代谢，氧化磷酸化，氨基酸生物合成、代谢以及植物激su信号转导和生长素生物合成等。并且揭示了环状RNA与小麦叶片脱水抗性相关功能基因表达之间关系。越来越多的研究表明circRNA可发挥miRNA海绵或ceRNA的作用。

一、环状RNA表达谱： 作者将50个CRC患者和50个正常人的血清样品分别随机分为5组均匀混样，对混样后的5v5个样 品进行了外泌体全转录组测序, 检测到1924个环状RNA, 来源基因在各染色体上均有分布，环状大部分长度小于500nt。 二、CRC患者和健康人中环状RNA的差异表达 接着作者筛选出了122个在CRC与健康人血清外泌体中差异表达的环状RNA，其中100个明显上调，22个明显下调。其中65个为新发现的环状RNA。 三、差异环状RNA的功能预测 通过对环状RNA来源基因的GO分析预测差异环状RNA的功能，结果显示上调的环状的潜在功能富集在蛋白修饰和细胞对内源性刺激的反应相关功能， 高尔基体相关功能。此外KEGG分析还找到了这些基因参与的4个相关通路。大多数来源于外显子，少部分由内含子直接环化形成。贵州研究环状

circRNA 早于20世纪70年代在RNA病毒中被发现。北京ac4c环状RNA实时定量PCR

研究思路： 作者首先分离了采用除草剂处理的雄性非洲爪蟾的睾丸组织，提取RNA，通过全转录组测序检测样本中环状RNA的表达变化。结果发现405个差异表达的环状RNA，其中44条上调和361条下调，这暗示着这些环状RNA可能在AZ污染过程中发挥作用。接下来通过环状RNA定量PCR检测和RNase R耐受性实验验证了环状RNA的表达量和结构。随后通过生信分析如GO及KEGG分析对差异表达的环状RNA进行了功能预测。GO分析表明这些RNA分子主要参与19条信号通路，其中Wnt信号通路和黄体酮介导的卵母细胞成熟通路可能是AZ污染涉及的信号通路。CircRNA-miRNA互作网络图揭示了环状RNA作用靶miRNA及可能的功能。本文研究了非洲爪蟾的环状RNA表达谱，为后续分子机理详细研究提供诸多靶分子。北京ac4c环状RNA实时定量PCR

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