海南外泌体环状

研究思路： 作者首先分离了小鼠脑组织，提取脑周质外泌体，通过外泌体全转录组测序检测TBI脑周组织外泌体中环状RNA的表达变化。结果发现231个差异表达的环状RNA，其中155个上调，76个下调。接下来通过生信分析如GO及KEGG分析对外泌体差异表达的环状RNA进行了功能预测。GO分析表明这些RNA分子主要参与神经损伤修复，神经系统发育及神经信号传导相关，这些分子同时主要富集在cGMP-PKG信号通路。CircRNA-miRNA互作网络图揭示了环状RNA作用靶miRNA及可能的功能。本文first研究了大脑创伤外泌体中环状RNA变化，为后续分子机理详细研究提供诸多靶分子，也为大脑创伤的干预医治提供潜在的靶点。circRNA主要由外显子构成，少部分由内含子环化形成。海南外泌体环状

2.环状RNA定量PCR及RNase R耐受实验，验证环状RNA的表达和结构 为了验证测序结果的准确性，研究人员随机选取了8条差异表达的环状RNA，利用“divergent primers”进行环状RNA定量PCR检测和RNase R耐受性实验。所有环状RNA的表达都能够被定量PCR实验检测到，并且定量PCR结果与测序结果趋势一致，表明环状RNA测序结果准确性非常高。所有环状RNA都能抵抗RNase R的消化，进一步证实了这些RNA的环形结构。云序生物作为国内早期提供环状RNA测序的测序公司，自行建立的环状RNA数据库circDB，借物种覆盖广、数据量大、疾病背景多的特点为客户提供好的服务。中国台湾甲基化环状环状 RNA 可以起到 microRNA 海绵的作用。

鸡白血病病毒亚群（ALV-J）是一类逆转录病毒，该病毒会引起一种重要的感ran性疾病。患病的家禽会导致产蛋率的下降，大面积影响到家禽养殖产业。感ranALV-J的鸡免疫系统会受到严重的抑制并引起多种tumour疾病从而产生很高的死亡率，目前还不能通过接种疫苗的方式来防御这种疾病。来自华南农业大学广东省重点实验室的研究团队通过环状RNA测序的方式研究了病毒抗性与病毒易感的鸡肝脏组织当中环状RNA的表达，发现了32个差异表达的环状分子，其中12个在ALV-J抗性样本中表达量明显升高，而20个在易感样本中表达量更高，而生信预测表明这些环状RNA分子能够调控免疫分子通路的信息传递从而改变生物体的抵抗力。

研究三：环状RNA分子功能机制 在确定Cia-cGAS具有明显细胞表型之后，作者围绕其分子机制展开了详细的探索。为了找到Cia-cGAS影响下游的靶基因，作者在敲除Cia-cGAS后进行转录组分析，发现差异表达的基因与IFN-α下游靶基因是一致的。且当Cia-cGAS敲除后I型IFN mRNAs 表达量也明显增高。结果，作者证实cia-cGAS通过调控I型IFN通路影响LT-HSC静息状态。接下来，作者针对Cia-cGAS在该通路中的作用机理进行了详细解析。作者直接采用RNA Pull Down技术手段找到与Cia-cGAS相互作用的功能蛋白。基于这一技术手段，作者发现Cia-cGAS与cGAS蛋白具有明显相互作用。cGAS RIP实验反向证实二者之间具有真实的相互作用。免疫荧光及FISH实验证实Cia-cGAS及cGAS细胞内共定位表达。基于EMSA等技术手段，作者找到了二者相互作用位点。后续作者补充大量生理生化实验，结果揭示LT-HSC中Cia-cGAS结合并抑制cGAS的活性，结果通过拮抗cGAS催化产物I型IFN来维持HSCs静息状态。CircRNA由称为“反向剪接”的非经典剪接事件产生。

云序环状RNA课题技术服务四大模块: 一、 环状RNA筛选： 1.1 circRNA测序 1.2全转录组测序（同时检测circRNA、lncRNA、mRNA） 二、环状RNA验证 2.1 qRT-PCR 对选定目标RNA分子可进行qPCR检测服务，包括引物设计与表达鉴定。 2.2 Sanger测序与RNase R酶耐受实验 对选定的环状RNA分子进行反式剪切位点引物设计，扩增后Sanger测序验证环状；使用RNase R酶处理环状RNA分子，验证环状RNA分子稳定性。 三、 CircRNA功能机制研究 3.1 RIP测序/qPCR 针对目标蛋白抗体把蛋白-RNA复合物沉淀下来，并对复合物上的RNA进行测序或对目标RNA进行qRCR表达分析。 与mRNA相比，m6A甲基化修饰在环状RNA上更普遍。黑龙江m6a环状

目前对m6A RNA流行检测手段为MeRIP-Seq技术。海南外泌体环状

样本要求 样品类型： 组织、细胞、体液或总RNA样品。其它类型样品请咨询工作人员。 样品量： a)细胞：2×106 b)组织：50 mg c)体液：全血、血清、血浆 2-3 ml 脑脊液：5 ml 尿液：50 ml d)总RNA：2 μg (OD260/280≥1.8;OD260/230≥1.5 无明显降解，电泳检测样品特征性条带完整清晰，无明显弥散或拖尾 ) 样品运输及保存： 样品运输：样品置于1.5mL管中，封口膜封好，干冰运输。 样品保存：细胞样品或新鲜组织块可用TRIZOL或RNA保护剂处理，液氮冻存后-80℃保存;血液样品应使用EDTA抗凝，不可用肝素;RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中，-80℃保存，避免反复冻融。海南外泌体环状

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