甘肃RIP环状

研究三：环状RNA分子功能机制 在确定Cia-cGAS具有明显细胞表型之后，作者围绕其分子机制展开了详细的探索。为了找到Cia-cGAS影响下游的靶基因，作者在敲除Cia-cGAS后进行转录组分析，发现差异表达的基因与IFN-α下游靶基因是一致的。且当Cia-cGAS敲除后I型IFN mRNAs 表达量也明显增高。结果，作者证实cia-cGAS通过调控I型IFN通路影响LT-HSC静息状态。接下来，作者针对Cia-cGAS在该通路中的作用机理进行了详细解析。作者直接采用RNA Pull Down技术手段找到与Cia-cGAS相互作用的功能蛋白。基于这一技术手段，作者发现Cia-cGAS与cGAS蛋白具有明显相互作用。cGAS RIP实验反向证实二者之间具有真实的相互作用。免疫荧光及FISH实验证实Cia-cGAS及cGAS细胞内共定位表达。基于EMSA等技术手段，作者找到了二者相互作用位点。后续作者补充大量生理生化实验，结果揭示LT-HSC中Cia-cGAS结合并抑制cGAS的活性，结果通过拮抗cGAS催化产物I型IFN来维持HSCs静息状态。circRNA分子呈封闭环状结构，不受RNA外切酶影响。甘肃RIP环状

斑马鱼作为一种重要的模式生物，对于其环状RNA的研究还尚未报道。作者以雌雄斑马鱼混合组织为样品，通过云序生物提供的环状RNA测序和生物信息学服务发表了全世界首篇斑马鱼环状RNA表达谱文章。本研究共筛选到3868条环状RNA，为后续研究鱼类环状RNA的生物学功能奠定基础。环状RNA“一站式”服务一直以来是云序生物的主打产品，严格的质控把关、严谨的实验设计、出色的生信分析以及贴心的售后服务造就了多项世界首篇环状RNA研究文章，受到了广大客户的一致好评。中国香港云序生物环状环状RNA可通过RNA介导间接与蛋白质发生关联。

研究背景：利用高通量测序手段，研究者们在拟南芥、小鼠、果蝇和人体内都发现了环状RNA的高度表达，证明了环状RNA在不同物种中存在。目前，已经进行过环状RNA研究的物种数量还非常有限，环状RNA数据库circBase中已收录的物种有7个。作为一种重要的模式生物，非洲爪蟾的环状RNA尚未见报道。本文通过云序生物提供的一站式环状RNA测序、环状RNA定量PCR、环状RNA的RNaseR耐受性实验和生物信息学服务于全世界进行了非洲爪蟾环状RNA表达谱的构建，为后续研究脊椎动物环状RNA的生物学功能奠定了基础，非常具有借鉴意义。

环状RNA是什么？环状RNA（circRNAs）是一类不具有5’末端帽子和3’末端poly(A)尾巴、并以共价键形成环形结构的非编码RNA分子。目前发现的circRNAs主要来源于基因外显子exon，但还有其他类型，比如来源于内含子intron，基因间intergenic，反义链antisense，重叠区senseoverlapping。首先需要确定好研究物种，疾病模型，样品类型等基本信息。接下来，通过高通量手段即RNA-seq（云序提供全转录组-seq或circRNA-seq）或文献报道，筛选差异表达的circRNA。如果想短平快的发表3-5分的文章，那么表达谱分析显得再合适不过了。如果有大量的临床样本，那么做分子标志物也是很easy的，思路和表达谱分析相似如下图展示，不过多了临床样本的统计和验证。（比如KM曲线，ROC曲线，PAM分析等等）m6A是真核生物mRNA上常见的一种转录后修饰。

环状RNA是一种新型的非编码RNA分子，是继miRNA和长链非编码RNA之后，近两年来热门的明星分子。随着测序技术与生物信息学分析手段的高速发展，研究者们对这种明星分子有了空前的认识。环状RNA以其独特的反式剪接方式形成，普遍存在于多种生物体内，并在cancer、心血管疾病和神经退行性疾病等多种人类重大疾病发挥重要的调控作用。利用高通量测序手段，研究者们在拟南芥、小鼠、果蝇和人体内都发现了环状RNA的高度表达，证明了环状RNA在不同物种中普遍存在。circRNA可作为RBP海绵，即MBL与cirMbl的直接相互作用。天津RIP环状

CircRNA由称为“反向剪接”的非经典剪接事件产生。甘肃RIP环状

3.2RNApull-down+MS/WB/qPCR/RNA-Seq设计目标RNA生物探针把相应的结合蛋白质与RNA复合物沉淀下来，蛋白质谱检测或WB检测与RNA结合的蛋白。设计目标RNA生物探针把相应的结合蛋白质与RNA复合物沉淀下来，qPCR检测或RNA-seq检测与RNA结合的RNA。3.3双荧光素酶报告实验双荧光素酶报告实验检测两个基因之间的互作。3.4病毒液以及siRNA设计提供circRNA过表达以及干扰慢病毒，腺病毒以及设计siRNA。四、CircRNA修饰研究4.1m6A/m5C/ac4C/m7G/m1A等修饰针对环状RNA各类修饰进行高通量筛选。4.2MeRIP-circRNA-PCR验证对高通量测序的结果，通过qPCR进行进一步验证。甘肃RIP环状

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