云南ctDNA甲基化

案例1: m6Am 测序揭示了人类转录组中 m6Am 甲基化的动态性 原文：m6Am-seq reveals the dynamic m6Am methylation in the human transcriptome 期刊：Nature Communication 影响因子：13.78 北京大学的研究人员开辟了一种新型的 m6Am 修饰 RNA 的测序方法，使用抗体拉取 5’ 帽子片段富集 m6Am 修饰的 RNA 区域，再在特定生化环境条件下使用 FTO 酶来区分 m6Am 与 m6A 修饰，进而可达到精细至单碱基水平的 m6Am RNA 测序。使用该方法对人类转录组测序的结果显示，m6Am 修饰的分布主要局限于 mRNA 5’ 帽子下游的翻译起始位点，并且多数具有 BCA 的序列 motif 特征（B=C/U/G）。对细胞施予热激、低氧等应激性刺激时，细胞转录组的 m6Am 水平有明显上升，说明 RNA 的 m6Am 动态修饰可能参与了细胞应激性反应。针对低氧环境刺激的进一步 GO 分析显示，m6Am 水平升高的基因与内质网应激调节的生物学过程有关。m6A是真核生物mRNA上常见的一种转录后修饰。云南ctDNA甲基化

研究还发现，m6Am 修饰是一个可逆的动态修饰，当细胞遭遇热激、低氧等应激性刺激时 m6Am 水平上升，说明 m6Am 可能在细胞应激反应中扮演了重要角色。近来也有研究发现，除了 mRNA 的较早编码核苷酸残基以外，在 snRNA 内部也有 m6Am 甲基化修饰的分布。虽然 m6Am 修饰早在 1975 年就已经被人类发现，但由于检验手段的匮乏，科学家难以区分出 m6A 修饰与 m6A 修饰，因此直到近年来 m6Am 测序技术逐渐发展成熟，才为进一步深入研究 m6Am 这一重要的 RNA 修饰铺平了道路。环状DNA甲基化表达m7G RNA甲基化修饰作为一类新型RNA甲基化。

技术简介 2’-O-RNA甲基化是一种受RNA甲基化酶或纤维蛋白酶作用下，核糖RNA在2’位置上发生甲基化的化学修饰。在哺乳动物、酵母、植物、病 毒等物种中普遍存在。已有研究表明，2’-O-RNA甲基化修饰在mRNA、tRNA、rRNA、miRNA等分子上分布。从结构上，2’-O-RNA甲基化通过提高核苷酸的疏水性，从而增强其稳定性。已有研究表明，2’-O-RNA甲基化影响mRNA与蛋白的结合、调控rRNA翻译效率、参与tRNA识别等生物过程。近年来，2’-O-RNA甲基化修饰作为一类新型RNA甲基化，高影响因子文章不断，是继m6A修饰之后的又一表观转录组学热点。

样本要求 1）样品类型：细胞、新鲜组织或RNA 样品。 2）样品量： 细胞：2×107 组织：500 mg-1 g RNA：30 - 300 μg，浓度不低于100 ng/μL 3）RNA 质量要求： OD260/280：1.8~2.1 浓度≥ 100 ng/μl RNA 无明显降解（28S:18S ≥ 1.5 或者RIN ≥ 7） 4）样品保存： 新鲜组织可用RNA保护剂处理或液氮冻存后，-80℃保存。 细胞样品，离心收集细胞沉淀后用PBS洗2遍，直接-80℃保存；RNA 样品可溶于乙醇或RNA-free 的超纯水中，-80℃保存。样品保存 Note:样品保存期间避免反复冻融。 5）样品运输：样品置于1.5 ml Eppendorf管或冻存管中，封口膜封好，装在塑料袋中，干冰运输。包括：mRNA 5’帽子结构、mRNA内部、pri-miRNA、转运RNA（tRNA）和核糖体RNA（rRNA）。

在这篇文章中，发现番茄果实成熟过程中，mRNA m6A甲基化表现出与DNA甲基化相似的动态变化。RNA甲基组分析表明，m6A甲基化是番茄果实mRNA中普遍存在的修饰，且m6A位点富集于终止密码子周围和3'UTR区。在具有DNA超甲基化的成熟缺陷表观突变体无色非成熟(Cnr)的果实中，有1100多个转录本显示m6A水平升高，而只有134个转录本显示m6A水平降低，表明m6A的整体水平升高。m6A沉积通常与转录本丰度呈负相关。云序优势 一站式服务： 客户只需提供细胞、组织或RNA，云序生物为您完成从MeRIP富集，文库制备，上机测序到数据分析整套服务流程。 云序生物自2018年推出了超微量RNA甲基化测序。青海ctDNA羟甲基化

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