技术原理 为了系统性揭示RNA O8G氧化修饰,云序生物提供了成熟的 RNA O8G氧化MeRIP-Seq技术服务。技术原理如下:将RNA O8G氧化特异性抗体与被随机打断的RNA的片段进行共孵育,抓取有O8G氧化修饰的片段进行测序;同时需要平行测序一个对照(Input)样本,对照样本为未进行IP反应的RNA的片段。对照样本用于消除非特异性抓取O8G氧化片段的背景。对比免疫共沉淀IP样本和Input样本中的序列片段,将O8G氧化修饰位点定位到转录组上,并根据RNA-seq数据,计算样本中O8G氧化程度。 配合专业的生物信息学分析,云序生物可进一步提供高精度的O8G氧化图谱,帮助客户揭示O8G氧化在生物学功能和潜在的作用机制。种种研究迹象表明m6A 存在于很多物种中,占到了 RNA甲基化修饰的80%。吉林甲基化
m6A甲基化已经被证明与植物对病原体的抗性有关。然而,小麦(Triticum aestivum) 全转录组m6A谱及其在小麦抗小麦黄花叶病毒(WYMV)中的潜在生物学功能尚未见报道。这项研究是shou次鉴定两个不同抗WYMV小麦品种的转录组m6A修饰谱。通过对m6A-MeRIP-seq数据的分析,作者在WYMV感ran的抗病小麦品种(WRV)和WYMV感ran的敏感小麦品种(WSV)中鉴定出25752个共有m6A峰和30582个共有m6A基因,这些峰主要富集在编码序列3‘UTR区和终止密码子中。GO分析和RNA测序数据显示,m6A和mRNA水平均发生明显变化的基因与植物防御反应有关。重庆rDNA甲基化m7G RNA甲基化修饰作为一类新型RNA甲基化。
PNAS| 8-oxoG在mRNA中的积累可以改变哺乳动物细胞中的蛋白质翻译 发表时间:2018年4月17号 影响因子:9.412 PNAS杂志发表了来自国家老年医学中心、北京医院研究的一篇有关O8G氧化修饰改变哺乳动物细胞中蛋白合成的研究成果。文章题目为“Transcriptional mutagenesis mediated by 8-oxoG induces translational errors in mammalian cells”。 哺乳动物细胞内形成的活性氧可以在mRNA中产生8-oxoG修饰,这一氧化修饰在基因表达过程中会导致碱基错配。本研究首先构建了一种基于超敏荧光素酶Gluc(Gussia luciferase)的报告基因检测系统,通过第二代测序技术发现当RNA中8-oxoG含量增加使U-to-G位点增加,从而诱导表达淀粉样前体蛋白的淀粉样β肽(老年痴呆的重要标志物)。该研究结果表明,8-oxoG在mRNA中的积累可以改变哺乳动物细胞中的蛋白质合成。本论文的发表为深入氧化修饰与蛋白合成间的分子机理提供了全新的研究思路!
样本要求 样品类型 细胞、组织或RNA,其他样本类型请电询。 测序样品量 1.单碱基测序方式: a) 细胞:≥1×108 b) 组织:500 mg - 5 g c) RNA:100 μg - 300 μg 2. MeRIP测序方式: a) 细胞:≥2×107 b) 组织:100mg - 1g c) RNA:30 μg - 300 μg d) 超微量满足500 ng - 30 μg 样品运输及保存 样品运输:样品置于1.5mL离心管中,封口膜封好,干冰运输。 样品保存:细胞样品或新鲜组织块可用TRIZOL或RNA保护剂处理,液氮冻存后-80℃保存;RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中,-80℃保存,避免反复冻融。除了拟南芥,在其他植物中如番茄、小麦、玉米以及高粱等均发现了RNA m6A甲基化修饰。
Nature | miR-1的位置特异性氧化导致心脏肥大 发表时间:2020年8月5日 影响因子:42.778 Nature上发表的来自韩国高丽大学Sung Wook团队的一篇研究在氧化还原相关疾病心肌肥大的大鼠模型中对氧化的miRNA进行了特异性测序研究。 作者在氧化还原相关疾病心肌肥大的大鼠模型中对氧化的microRNA(miRNA)进行了特异性测序。结果发现8-氧代鸟嘌呤2(o8G)修饰是选择性地在miRNA的特殊区域(位置2-8)产生的,并通过o8G-A碱基互补配对来调节其他mRNA。用肾上腺素能激动剂医治后主要在miR-1(7o8G-miR-1)的第7位诱导了o8G氧化修饰。单独引入的7o8G-miR-1或7U-miR-1(其中7位的G被U取代)足以引起小鼠心脏肥大,o8G-miR-1的mRNA靶基因在受影响的表型中起作用,反之对小鼠心肌细胞7o8G-miR-1的特异性抑制可减轻心脏肥大。o8G-miR-1也与心肌病患者有关。本研究表明miRNA的位置特异性氧化可以作为表观转录机制来协调病理生理学氧化还原介导的基因表达,为研究氧化修饰在病理生理学中的作用提供了新的思路。核糖RNA在2’位置上发生甲基化的化学修饰。浙江小RNA甲基化
将m1A RNA甲基化特异性抗体与被随机打断的RNA的片段进行共孵育。吉林甲基化
LncRNA m6Am-Exo-seq 测序服务 云序生物在国内shou批引入 m6Am-Exo-seq 测序服务,利用 5’ 核酸外切酶消除非目的性的 RNA 的片段上 m6A 修饰的信号干扰,选择性地获取 mRNA以及 LncRNA 的 5’ 帽子结构下游 m6Am 修饰富集区域的序列信息。接下来,我们对选择性获取到的 m6Am 修饰的 RNA 的片段进行反转录建库和高通量测序(测序结果将同时包含 mRNA 和 LncRNA)。通过后续的生物信息学分析,可以区分来自 mRNA 和 LncRNA 的测序片段,从而较全揭示 LncRNA和mRNA 的 m6Am 修饰位点,并推测其可能的生物学功能。 吉林甲基化