湖南tRNA甲基化

案例3：m6A RNA去甲基化酶ALKBH5通过结合lncRNA促进胶质瘤细胞 期刊：Cancer Cell 影响因子：27.43 近年来，m6A RNA修饰的研究已成为当今生命科学领域前沿研究之一，不断有高影响分子文章问世。m6A RNA修饰的催化、去除以及识别的分子机理研究越来越清晰，此时人们更关心m6A RNA修饰与重大疾病之间的相关性。近期Cancer Cell报道了m6A RNA去甲基化酶ALKBH5在神经胶质瘤中具有生理作用。在本研究中，去甲基化酶ALKBH5在恶性胶质瘤干性样细胞表达上调，而ALKBH5高表达的胶质细胞瘤患者预后生存率更差。通过敲低ALKBH5，meRIP鉴定m6A RNA甲基化修饰模式，基因芯片检测差异表达>2倍的基因，终筛选到与细胞周期调控相关的FOXM1基因，其在GSCs的自我修复和tumsour形成中起到关键作用。RNA去甲基化可以提高水稻和马铃薯植株的产量和生物量。湖南tRNA甲基化

ac4C RNA乙酰化是在RNA ac4C修饰酶的作用下，使N4位乙酰胞嘧啶发生乙酰化的一种保守的化学修饰（N4-acetylcytidine）。早期研究发现该修饰存在于真核生物中丝氨酸及亮氨酸tRNA和18S rRNA上，导致Watson-Crick碱基热稳定性增加，调控蛋白合成中的编码准确性；近期研究发现ac4C分布在人类转录组中，大多数位点出现在编码序列（CDS）内，并且通过改善的mRNA稳定性和翻译促进靶基因表达。目前，ac4C RNA乙酰化修饰作为一类新型RNA修饰，是继m6A修饰之后的又一表观转录组学热点和“超级潜力股”！广东pri-miRNA甲基化云序生物自2018年推出了超微量RNA甲基化测序。

样本要求 1）样品类型：细胞、新鲜组织或RNA 样品。 2）样品量： 细胞：2×107 组织：500 mg-1 g RNA：30 - 300 μg，浓度不低于100 ng/μL 3）RNA 质量要求： OD260/280：1.8~2.1 浓度≥ 100 ng/μl RNA 无明显降解（28S:18S ≥ 1.5 或者RIN ≥ 7） 4）样品保存： 新鲜组织可用RNA保护剂处理或液氮冻存后，-80℃保存。 细胞样品，离心收集细胞沉淀后用PBS洗2遍，直接-80℃保存；RNA 样品可溶于乙醇或RNA-free 的超纯水中，-80℃保存。样品保存 Note:样品保存期间避免反复冻融。 5）样品运输：样品置于1.5 ml Eppendorf管或冻存管中，封口膜封好，装在塑料袋中，干冰运输。

LncRNA m6Am-Exo-seq 测序服务 云序生物在国内shou批引入 m6Am-Exo-seq 测序服务，利用 5’ 核酸外切酶消除非目的性的 RNA 的片段上 m6A 修饰的信号干扰，选择性地获取 mRNA以及 LncRNA 的 5’ 帽子结构下游 m6Am 修饰富集区域的序列信息。接下来，我们对选择性获取到的 m6Am 修饰的 RNA 的片段进行反转录建库和高通量测序（测序结果将同时包含 mRNA 和 LncRNA）。通过后续的生物信息学分析，可以区分来自 mRNA 和 LncRNA 的测序片段，从而较全揭示 LncRNA和mRNA 的 m6Am 修饰位点，并推测其可能的生物学功能。 将m1A RNA甲基化特异性抗体与被随机打断的RNA的片段进行共孵育。

m1A RNA甲基化是一类新发现的RNA甲基化，即RNA分子腺嘌呤第1位氮原子上的甲基化修饰（N1-methyladenosine，m1A）。研究表明，m1A是真核生物tRNA和rRNA丰度很高的一种转录后修饰，近期研究也表明m1A修饰可调控mRNA翻译。m1A修饰作为一类新型RNA甲基化，其功能和机制都亟待挖掘。 与m6A RNA检测方式一致，针对m1A修饰也采用MeRIP-seq技术，抗体富集的技术原理如下：将m1A RNA甲基化特异性抗体与被随机打断的RNA的片段进行共孵育，抓取有甲基化修饰的片段进行测序；同时需要平行测序一个对照（Input）样本，对照样本为未进行IP反应的RAN片段，对照样本用于消除非特异性抓取甲基化片段的背景。RNA 修饰在基因表达调控中扮演着非常重要的角色。海南pri-miRNA甲基化

RNA m6A是真核生物丰富和调节遗传信息的一种保守的转录后机制。湖南tRNA甲基化

m6A甲基化已经被证明与植物对病原体的抗性有关。然而，小麦(Triticum aestivum) 全转录组m6A谱及其在小麦抗小麦黄花叶病毒(WYMV)中的潜在生物学功能尚未见报道。这项研究是shou次鉴定两个不同抗WYMV小麦品种的转录组m6A修饰谱。通过对m6A-MeRIP-seq数据的分析，作者在WYMV感ran的抗病小麦品种(WRV)和WYMV感ran的敏感小麦品种(WSV)中鉴定出25752个共有m6A峰和30582个共有m6A基因，这些峰主要富集在编码序列3‘UTR区和终止密码子中。GO分析和RNA测序数据显示，m6A和mRNA水平均发生明显变化的基因与植物防御反应有关。湖南tRNA甲基化