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案例1: m6Am 测序揭示了人类转录组中 m6Am 甲基化的动态性 原文:m6Am-seq reveals the dynamic m6Am methylation in the human transcriptome 期刊:Nature Communication 影响因子:13.78 北京大学的研究人员开辟了一种新型的 m6Am 修饰 RNA 的测序方法,使用抗体拉取 5’ 帽子片段富集 m6Am 修饰的 RNA 区域,再在特定生化环境条件下使用 FTO 酶来区分 m6Am 与 m6A 修饰,进而可达到精细至单碱基水平的 m6Am RNA 测序。使用该方法对人类转录组测序的结果显示,m6Am 修饰的分布主要局限于 mRNA 5’ 帽子下游的翻译起始位点,并且多数具有 BCA 的序列 motif 特征(B=C/U/G)。对细胞施予热激、低氧等应激性刺激时,细胞转录组的 m6Am 水平有明显上升,说明 RNA 的 m6Am 动态修饰可能参与了细胞应激性反应。针对低氧环境刺激的进一步 GO 分析显示,m6Am 水平升高的基因与内质网应激调节的生物学过程有关。ctDNA 的 5mC 甲基化修饰研究仍然是一个未被充分探索的领域。山东甲基化表达

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研究表明,RNAm6A修饰影响mRNA的转录、定位、翻译、稳定性、剪接和核输出。然而,转录组m6A谱及其在白菜热胁迫中的潜在生物学作用尚缺乏足够的资料。通过MeRIP-seq获得白菜中RNA m6A修饰的first转录组全谱。同时,通过分析Input测序数据获得转录组数据。发现在正常组(CK)和热应激组(T43)中鉴定出11252个m6A共有峰和9729个含有m6A的共有基因。且CK组和T43组中,m6A峰均在3’UTR区高度富集。大约80%的基因有一个m6A位点。m6A峰的共识基序为AAACCV (V: U/A/G)。此外,关联分析发现m6A的甲基化程度与转录水平存在一定的相关性,说明m6A在基因表达中起一定的调控作用。新疆甲基化差异m6A甲基化是番茄果实mRNA中普遍存在的修饰。

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云序生物对O8G RNA氧化化检测手段为O8G-IP-Seq技术,技术原理如下: 将O8G特异性抗体与被随机打断的RNA的片段进行共孵育,抓取有O8G修饰的片段进行测序;同时需要平行测序一个对照(Input)样本,对照样本只含有打断的RNA的片段,并不添加O8G特异性抗体与其共孵育。对照样本用于消除非特异性抓取的O8G片段的背景。对比免疫共沉淀(IP)样本和对照样本(Input)中的序列片段,将O8G氧化修饰位点定位到转录组上,并根据RNA-seq数据,计算样本中O8G氧化程度及对RNA表达水平的影响。

m5C RNA是近年来发现的一类在tRNA及rRNA高丰度存在的甲基化修饰。利用高通量测序手段验证了非编码RNA以及部分mRNA中m5C存在,但是在不同物种、不同组织中m5C修饰分布图谱尚没有系统性报道。云序生物率先开展m5C RNA甲基化测序服务,采用经典重亚硫 酸盐处理的方式进行测序。在全转录范围内及tRNA水平查看基因m5C甲基化修饰水平。 通过高通量测序和生物信息分析,识别甲基化富集的基因组区域。 富集峰识别后,得到的是一堆基因组位置信息,通过生物信息分析利用邻近基因对富集峰进行注释,并根据峰中点相对于已知基因的位置,将富集峰为启动子峰、上游峰、内含子峰、外显子峰、基因间峰。 RNA 修饰在基因表达调控中扮演着非常重要的角色。

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目前还没有一种完善的方法可以在单碱基分辨率下对每个转录本进行m6A的鉴定,这对评估m6A丰度是必要的。作者开发了一种新的方法,称为Nanom6A,用于在单碱基分辨率下鉴定和定量m6A修饰,使用基于XGBoost模型的纳米孔直接RNA测序。并使用MeRIP-Seq和m6A-REF-seq验证了此方法,证实了较高的准确性。利用这种方法,作者进行了毛果杨茎分化木质部中转录组范围的m6A修饰定量分析,揭示了不同的可变聚腺苷酸化(APA)量会导致不同的m6A修饰比例。m6A在细胞加速mRNA代谢和翻译,以及在细胞分化、胚胎发育和压力应答等过程中起重要作用。全基因组甲基化怎么表示

m7G RNA甲基化修饰能够调节mRNA的转录。山东甲基化表达

云序优势 一站式服务: 客户只需提供细胞、组织或RNA,云序生物为您完成从MeRIP富集,文库制备,上机测序到数据分析整套服务流程。 样本要求 样品类型: 细胞、新鲜组织或RNA样品。其它类型样品请详询。 样品量: a) 细胞:2×107 b) 组织:100 mg-1 g c) RNA:30-300 μg(OD260/280:1.6-2.3;RNA无明显降解28S:18S>1.5或RIN>7) 样品运输与保存 样品运输:样品置于1.5mL离心管中,封口膜封好,干冰运输。 样品保存:细胞样品或新鲜组织块可用TRIZOL或RNA保护剂处理,液氮冻存后-80℃保存;RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中,-80℃保存,避免反复冻融。山东甲基化表达

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