为了更全检测小麦中所有环状RNA的表达情况,研究人员分别对PEG和水处理后的小麦幼苗叶子进行环状RNA测序,共发现了88条环状RNA。通过对环状RNA的基因组来源进行分析,发现环状RNA可分为5类,其中基因间(intragenic)产生的环状RNA占大多数。接下来,研究人员系统分析了不同样本之间环状RNA的表达情况,发现62条环状RNA差异表达,这暗示着这些环状RNA可能在脱水应激中发挥作用。为了验证测序结果的准确性,研究人员挑选了16条环状RNA,利用“divergent primers”进行环状RNA定量PCR检测。环状RNA在tumour领域的研究非常热门。贵州环状全转录组测序
研究指出,环状RNA能够调控来源基因的表达。为了进一步了解小麦差异表达环状RNA的功能,研究人员对它们的来源基因进行GO(Gene Ontology)分析。结果显示在脱水作用下,差异表达的环状RNA的来源基因可能在不同的生物进程和分子功能方面发挥作用。2013年两篇Nature文章揭示环状RNA具有miRNA海绵的功能,它可以吸附miRNA来调节基因的表达。研究人员对不同样本之间差异表达的62种环状RNA进行靶miRNA的结合预测。发现其中6种环状RNA具有潜在的miRNA结合位点。随后,研究人员对这些miRNA下游靶基因进行功能预测,分析结果显示靶基因参与的信号通路都与脱水应激反应相关,暗示着这7种差异表达的环状RNA可能通过miRNA海绵机制发挥作用。云序生物作为业内成熟的测序公司,能为不同的客户提供个性化的服务。上海研究环状测序云序生物提供一站式环状RNA实时定量PCR技术服务。
(human papillomavirus)染上以及酗酒、吸烟等因素都有可能导致舌鳞状细胞cancer(tongue squamous cell carcinoma, TSCC)的发生,恶性舌cancer的增长会严重影响到病人的吞咽、呼吸、语言等正常生理功能,严重影响病人的生活质量。南通大学吴昊团队应用全转录组测序技术对TSCC病人的舌ai组织进行环状RNA研究,这一工作为舌ai发病机制和医治研究提供更多理论依据和研究基础,对332个差异表达环状RNA富集分析结果表明,这些环状分子可能参与cancer相关信号通路的调控。
研究二:环状RNA分子细胞表型 作者发现Cia-cGAS是由D430042O09Rik的4、5、6号外显子连接成环。且位于外显子上下游的内含子区域具有成环所需高度同源序列。作者通过Cas9技术手段,敲除一端同源序列后,成功获得Cia-cGAS 敲除小鼠模型。敲除小鼠中LSK祖细胞明显增多,LT-HSC明显减少,且基因敲除小鼠出生6个月后会死于贫血。对基因敲除小鼠中LT-HSC进行BrdU染色,结果说明敲除小鼠中LT-HSC细胞处于增殖分裂活跃期。同时脉冲标记H2B-GFP小鼠模型证实Cia-cGAS敲除后,静息状态的LT-HSC细胞比例明显降低。circRNA形成没有3’末端和5’末端的共价环状结构。
研究三:环状RNA分子功能机制 在确定Cia-cGAS具有明显细胞表型之后,作者围绕其分子机制展开了详细的探索。为了找到Cia-cGAS影响下游的靶基因,作者在敲除Cia-cGAS后进行转录组分析,发现差异表达的基因与IFN-α下游靶基因是一致的。且当Cia-cGAS敲除后I型IFN mRNAs 表达量也明显增高。结果,作者证实cia-cGAS通过调控I型IFN通路影响LT-HSC静息状态。接下来,作者针对Cia-cGAS在该通路中的作用机理进行了详细解析。作者直接采用RNA Pull Down技术手段找到与Cia-cGAS相互作用的功能蛋白。基于这一技术手段,作者发现Cia-cGAS与cGAS蛋白具有明显相互作用。cGAS RIP实验反向证实二者之间具有真实的相互作用。免疫荧光及FISH实验证实Cia-cGAS及cGAS细胞内共定位表达。基于EMSA等技术手段,作者找到了二者相互作用位点。后续作者补充大量生理生化实验,结果揭示LT-HSC中Cia-cGAS结合并抑制cGAS的活性,结果通过拮抗cGAS催化产物I型IFN来维持HSCs静息状态。环状RNA不同物质间进化上具有保守性。吉林m1A环状测序
种类繁多,而且有些circRNA高于其相应的线性RNA10倍之多。贵州环状全转录组测序
研究背景: 造血干细胞(HSC)自我更新和分化之间的平衡打破将导致骨髓衰竭及恶性血液tumour发生。然而,HSCs如何维持其静止状态并避免I型干扰素(IFN)介导能量耗竭、细胞凋亡仍未可知。本文一种名为cia-cGAS的环状RNA,它在长效(LT)-HSCs细胞核中高度表达。小鼠Cia-cGAS缺陷将导致I型IFN在骨髓中高表达并伴随静息LT-HSC数量明显减少。在稳态条件下,cia-cGAS在细胞核中通过结合DNA传感器cGAS以阻断其合酶活性,由此保护静息LT-HSC免于被cGAS介导耗尽凋亡。此外,cia-cGAS与线性cGAS相比,与cGAS结合亲和力更强,由此抑制cGAS介导LT-HSCs中I型IFN产生。本文揭示了一个新型环状RNA——cia-cGAS可结合DNA敏感的cGAMP合酶cGAS并抑制其活性,调控长效造血干细胞(LT-HSC)静息状态。贵州环状全转录组测序
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