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从环状RNA结合功能蛋白角度,成功的向我们展示了核内circRNA具有重要生理功能,以及该类型circRNA的研究方法。首先通过高通量测序筛选与造血干细胞干性维持相关的circRNA分子,围绕该分子设计一系列体内、体外干扰实验,确定其可引起干细胞干性维持相关细胞表型改变。后续,与circRNA 海绵机制研究类似,RNA Pull Down实验及RIP实验成为机制研究成功与否的关键钥匙。作者基于RNA Pull-down技术筛选到可能与Cia-cGAS相互作用的蛋白质,并进一步通过RIP实验反向验证。目前发现的circRNA主要来源于基因外显子。山西RIP环状rna

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研究背景: 造血干细胞(HSC)自我更新和分化之间的平衡打破将导致骨髓衰竭及恶性血液tumour发生。然而,HSCs如何维持其静止状态并避免I型干扰素(IFN)介导能量耗竭、细胞凋亡仍未可知。本文一种名为cia-cGAS的环状RNA,它在长效(LT)-HSCs细胞核中高度表达。小鼠Cia-cGAS缺陷将导致I型IFN在骨髓中高表达并伴随静息LT-HSC数量明显减少。在稳态条件下,cia-cGAS在细胞核中通过结合DNA传感器cGAS以阻断其合酶活性,由此保护静息LT-HSC免于被cGAS介导耗尽凋亡。此外,cia-cGAS与线性cGAS相比,与cGAS结合亲和力更强,由此抑制cGAS介导LT-HSCs中I型IFN产生。本文揭示了一个新型环状RNA——cia-cGAS可结合DNA敏感的cGAMP合酶cGAS并抑制其活性,调控长效造血干细胞(LT-HSC)静息状态。云南m6a环状RNA研究云序生物对m6A RNA-seq实验每一步骤均设有关键质控。

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研究一:环状RNA分子筛选及验证 为探索造血干细胞功能相关的circRNA分子,作者比较了小鼠不同造血干细胞(LT-HSC,ST-HSC和MPPs)中全转录组变化情况,找出了156种明显性差异表达的circRNA分子,其中49种在LT-HSC中高表达。RNase R及qPCR实验证实其中9种为真实LT-HSC中高表达环状RNA 分子。为有效筛选造血干细胞相关的circRNA分子,作者通过体内circRNA干扰实验,发现只有干扰Cia-cGAS后才能明显影响小鼠体内造血干细胞亚群分布,并表现为LSK祖细胞数量明显增加,与此同时LT-HSC细胞数量明显减少。因此,作者结合转录组数据以及体内、体外验证实验,锚定Cia-cGAS分子进行后续分子机制研究。

环状RNA作为研究持续火热的明星分子,不同于对其丰富的表达谱研究,环状RNA功能机制研究还处在起步阶段。环状RNA研究多为miRNA海绵机制,部分circRNA可竞争性结合miRNA,解除miRNA对靶基因的抑制作用,上调靶基因的表达。其实,环状RNA可以通过结合不同种类的功能蛋白,分别在转录前、后及翻译水平严格调控细胞生殖生长等过程。云序曾对环状RNA经典研究思路进行过详细解析(2018国自然研究热点一环状RNA研究深度剖析),感兴趣的老师可以查询浏览。circRNA分子呈封闭环状结构,不易被核酸外切酶RNaseR降解,比线性RNA更稳定。

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环状RNA是一种新型的非编码RNA分子,是继miRNA和长链非编码RNA之后,近两年来热门的明星分子。随着测序技术与生物信息学分析手段的高速发展,研究者们对这种明星分子有了空前的认识。环状RNA以其独特的反式剪接方式形成,普遍存在于多种生物体内,并在cancer、心血管疾病和神经退行性疾病等多种人类重大疾病发挥重要的调控作用。利用高通量测序手段,研究者们在拟南芥、小鼠、果蝇和人体内都发现了环状RNA的高度表达,证明了环状RNA在不同物种中普遍存在。越来越多的研究表明circRNA可发挥miRNA海绵或ceRNA的作用。甘肃m5c环状DNA测序

环状RNA哪家做得好,还是上海松江区的云序生物比较好。山西RIP环状rna

ac4C RNA乙酰化是在RNA ac4C修饰酶的作用下,使N4位乙酰胞嘧啶发生乙酰化的一种保守的化学修饰(N4-acetylcytidine)。早期研究发现该修饰存在于真核生物中丝氨酸及亮氨酸tRNA和18S rRNA上,导致Watson-Crick碱基热稳定性增加,调控蛋白合成中的编码准确性;近期研究发现ac4C分布在人类转录组中,大多数位点出现在编码序列(CDS)内,并且通过改善的mRNA稳定性和翻译促进靶基因表达。目前,ac4C RNA乙酰化修饰作为一类新型RNA修饰,是继m6A修饰之后的又一表观转录组学热点和“超级潜力股”!山西RIP环状rna

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