不同于已经得到深入研究的基因组 DNA 的表观遗传修饰,ctDNA 的 5mC 甲基化修饰研究仍然是一个未被充分探索的领域,对于科研者来说是一个尚待挖掘的金矿。既然如此,那我们是不是可以按图索骥,直接将基因组 DNA 甲基化修饰研究的传统方法照搬到 ctDNA 的5mC 甲基化修饰研究上来呢?答案是否定的:因为 ctDNA 含量低、缺乏染色质结构的保护,若直接将研究基因组 DNA 的 5mC 修饰的传统方法应用于 ctDNA,则会遇到南橘北枳的困境,云序生物提供的MeDIP测序服务,将甲基化DNA免疫共沉淀技术(MeDIP)和高通量测序相结合,能够帮助客户快速地获取全基因组范围内的DNA甲基化图谱,并比较不同样品中的甲基化分布差异。作者还发现血浆中的胎儿 环状DNA 与母体 环状DNA 相比甲基化程度相对较低。海南分析表观遗传组测序介绍
均一的双核苷酸分布由于“GC覆盖度偏误”的存在,在连续双核苷酸的检出效率方面,WGBS对于不同的双核苷酸存在较严重的偏误,而EM-seq则能展示出均一的覆盖情况。更强的匹配率和更低的重复率相比于WGBS,EM-seq测序结果与参考基因组的匹配率更高,同时重复率更低。用更少的测序检出更多的CpG岛同等测序覆盖深度的情形下,EM-seq所发现的CpG数目要远多于WGBS,在这其中有很大比例的CpG位点是只能能用EM-seq法才能检测到的。云序生物提供的MeDIP测序服务,将甲基化DNA免疫共沉淀技术(MeDIP)和高通量测序相结合,能够帮助客户快速地获取全基因组范围内的DNA甲基化图谱,并比较不同样品中的甲基化分布差异。西藏分析表观遗传组测序内容环状DNA连登《Nature》《Cell》等期刊,彻底颠覆了人们对基因遗传的传统认知。
样本要求样品类型:细胞、组织、体液、总gDNA或IP后DNA。其它类型样品请详询。样品量:a)细胞5×108b)组织100mgc)IP后DNA10ngd)gDNA3μg样品运输及保存:样品运输:样品置于1.5mLEppendorf管中,封口膜封好,干冰运输,DNA可用冰袋运输。样品保存:细胞样品或新鲜组织块切块,液氮冻存后-80℃保存;DNA样品短期内可-20℃,避免反复冻融。云序生物提供的MeDIP测序服务,将甲基化DNA免疫共沉淀技术(MeDIP)和高通量测序相结合,能够帮助客户快速地获取全基因组范围内的DNA甲基化图谱,并比较不同样品中的甲基化分布差异。
指导用药:与传统组织相比,取样简单、相对无创。采用ctDNA检测相应驱动基因突变,指导靶向医治。也可同时进行耐药突变检测,指导耐药后医治。tumsor代表性:tumsor异质性强,传统组织样本的检测有时会因代表性欠佳而使医治失败。ctDNA能更好的反映tumsor全貌,有效避免tumsor异质性难题。实时监控:无创易获取的特点,使ctDNA样本能随时获得,对全程医治中的各个时间点进行相应突变的实时监控,动态监测满足了个体化医治时代的需求。云序生物提供的MeDIP测序服务,将甲基化DNA免疫共沉淀技术(MeDIP)和高通量测序相结合,能够帮助客户快速地获取全基因组范围内的DNA甲基化图谱,并比较不同样品中的甲基化分布差异。可用于协助评估用药疗效、复发及医治后期转移动态的监测。
ctDNA/cfDNA 之所以引起学界这么大的研究热情,与其在临床上广阔的应用前景是分不开的。相比于目前tumsor诊断当中普遍使用的组织活检,ctDNA 测序对患者的伤害小,且可以多次、实时地进行提取检测,在临床运用上具有极大的优势,有助于ai症的早发现、早医治,被誉为“液体切片活检”。ctDNA 的甲基化检测,同时结合了 ctDNA 测序于 DNA 甲基化测序的优势,在ai症检测方面提供更好的特异性和灵敏度。在 2021 年,已有 ctDNA/cfDNA 甲基化测序相关的商业化产品面市同时检测环状DNA及其甲基化状况,节约样品,性价比高。湖南分析表观遗传组测序文章
文库制备,上机测序到数据分析整套服务流程。海南分析表观遗传组测序介绍
游离于染色体基因组之外的DNA(extrachromosomalDNA,ecDNA)被发现常常以环状的形式存在,这种形式的DNA被称为环状DNA(extrachromosomalcircularDNA)。目前也习惯将巨大的环状DNA(>1Mb)称为ecDNA,而将相对较小的环状DNA称为eccDNA。环状DNA连登《Nature》《Cell》等期刊,彻底颠覆了人们对基因遗传的传统认知,成为了很有潜力的科研新热点。云序生物环状DNA甲基化测序技术基于转座酶和m5C位点酶学转化方法,用核酸外切酶V消化以去除线性DNA。通过转座酶打开环状DNA的环形结构,并在DNA的片段的两端加上接头。通过Klenow酶修复转座产物的末端缺口。通过温和的酶转化法,将未甲基化的胞嘧啶(C)高效地转化为尿嘧啶(U),后续进行文库构建与高通量测序,从而获得发生甲基化修饰的环状DNA。该技术可以同时检测环状DNA和环状DNA的甲基化修饰状态,为环状DNA的深入研究及新型分子标志物的开发提供了新的技术手段。海南分析表观遗传组测序介绍
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