案例2:鼻细胞表观基因甲基化作为儿童哮chuan和气道炎症生物标志物的研究期刊:NatureCommunication影响因子:11.878本文作者研究团队首先借助850K甲基化芯片平台对547名儿童鼻孔细胞表观基因组做了DNA甲基化检测分析,并对当前的哮chuan、变应原致敏、变应性鼻炎、呼出气一氧化氮(FeNO)和肺功能进行了鼻表观基因组关联分析(EWAS)。结果显示DNA差异甲基化主要发生在哮chuan相关基因、参与Th2和嗜酸性反应的基因、以及可能改变呼吸上皮的通透性和功能的基因。作者还发现发现随着过敏和哮chuan生物标志物的升高,表观遗传年龄会加速。综上所述,鼻细胞外基因组甲基化可以作为哮chuan、过敏和气道气道炎症的敏感生物标志物,以及这些表型的特异性生物学过程。通过温和的酶转化法,将未甲基化的胞嘧啶(C)高效地转化为尿嘧啶(U)。青海技术表观遗传组测序结果
可以说,ctDNA的应用已经渗透到tumsor全程管理的各个环节。早期筛查:与甲基化检测结合,或能较早检出tumsor的发生;技术不断成熟,有望使其成为tumsor早筛的新方法。分子诊断:用于组织学检测的替代或有效补充,检测已知的驱动基因,如肺cancerEGFR、ALK突变等,指导医治。残余病灶检测:可基于ctDNA,进行术后分子残留病灶检测,并进一步预测巩固医治的疗效。疗效评估:系列、动态的检测ctDNA中的基因突变情况(如EGFR突变丰度),有效评估tumsor通路状态,评估靶向医治的疗效。山东表观遗传组测序文章客户需提供血浆,血清或体液样本,云序生物为您完成从ctDNA提取。
ATAC测序的全称是AssayforTransposaseAccessibleChromatinusingsequencing,运用测序手段研究转座酶可接近的染色质的一种技术。该技术通过转座酶对某种特定时空下开放的核染色质区域进行切割,进而获得在该特定时空下基因组中活跃转录的调控序列。这项技术只需少量细胞便可获得实时全基因组活性调控序列信息,应用于转录因子结合分析、核小体定位、活性调控元件分布等研究,在表观遗传机制研究领域有广阔的应用前景。云序生物对染色质开放区域进行研究的技术是利用ATAC测序技术,其原理为:利用DNA转座酶可以携带DNA去识别染色质开放区域。人为地将携带已知DNA序列标签的转座复合物(即带着测序标签的转座酶),加入到细胞核中,再利用已知序列的标签进行建库后测序,从而识别染色质的开放区域。
指导用药:与传统组织相比,取样简单、相对无创。采用ctDNA检测相应驱动基因突变,指导靶向医治。也可同时进行耐药突变检测,指导耐药后医治。tumsor代表性:tumsor异质性强,传统组织样本的检测有时会因代表性欠佳而使医治失败。ctDNA能更好的反映tumsor全貌,有效避免tumsor异质性难题。实时监控:无创易获取的特点,使ctDNA样本能随时获得,对全程医治中的各个时间点进行相应突变的实时监控,动态监测满足了个体化医治时代的需求。云序生物提供的MeDIP测序服务,将甲基化DNA免疫共沉淀技术(MeDIP)和高通量测序相结合,能够帮助客户快速地获取全基因组范围内的DNA甲基化图谱,并比较不同样品中的甲基化分布差异。还在tumsour发生和发展机理研究中发挥着重大的潜在价值。
样品类型:tumsor患者的血浆、血清或cfDNA。血浆和血清相比较而言,推荐使用血浆,以减少淋巴细胞来源的cfDNA干扰。样品量:血浆>5mL;血清>10mL;cfDNA>10ng。血浆提取:使用EDTA抗凝管收集全血,切勿冷冻保存,只能在2-8℃冰箱短暂存放,并尽快进行低温离心获取血浆。若不能进行低温离心,则需要使用添加专有稳定剂的STRECK无创管来保存全血,可在常温条件下离心。为了消除残留的细胞,血浆需要进行二次离心:first在4℃条件下以1600g离心10分钟;第二次在4℃条件下以16000g离心10分钟。样品保存:血浆、血清样品液氮速冻后-80℃冰箱保存。样品保存期间避免反复冻融。样品运输:封口膜封好样品,干冰运输。ctDNA特指来源于tumsour细胞的cfDNA,是液体活检主流方向。云南服务表观遗传组测序内容
cfDNA是人体组织排放到血液、尿液或脑脊液等循环体系中的降解的DNA小片段。青海技术表观遗传组测序结果
为了研究DPI,科学家发明了很多方法:凝胶阻滞、DNaseI足迹实验、甲基化干扰、体内足迹、酵母单杂、ChIP-Seq等。其中ChIP-Seq因其能真实、完整地反映结合在DNA序列上的靶蛋白,是目前全基因组水平研究DPI的标准实验技术。ChIP-Seq的基本过程包括甲醛交联将细胞内与DNA结合的蛋白固定,再裂解细胞,超声断裂DNA,将DNA-蛋白质复合物结合在特异性抗体上,再用可以结合抗体的ProteinA磁珠将抗体-蛋白-DNA复合物抓取下来,之后将DNA与蛋白解离,将DNA的片段补平,加A,加接头,进行高通量测序。然而,由于ChIP-Seq实验过程中的甲醛交联、染色质片段化、免疫共沉淀以及文库构建等步骤繁琐且条件难以控制,常规ChIP-Seq实验需要大量细胞,且实验重复性差、信噪比低。青海技术表观遗传组测序结果
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