EM-seq的优势相比于传统的WGBS拥有多种优势:DNA测序文库质量高、所需DNA起始量小相比于WGBS,EM-seq对DNA的损伤小,因此可以用更少DNA样品、更少的PCR轮数扩增出高质量的测序文库。云序生物提供的EM-seq服务,所需的DNA起始量可低至10ng。DNA文库的插入片段更长、更完整相比于WGBS,EM-seq处理后的DNA的片段更完整,长度更长,避免产生测序缺口。出色的GC覆盖均一性无论GC程度高低,EM-seq的覆盖度都有均匀且优良的表现;相比之下,WGBS测序文库高估了AT区,却低估了GC区,造成“GC覆盖度偏误”。环状DNA连登《Nature》《Cell》等期刊,成为了很有潜力的科研新热点。北京文章 表观遗传组测序文章
CUT&Tag技术研究蛋白质-DNA互作的优势原文:CUT&Tagforefficientepigenomicprofilingofsmallsamplesandsinglecells期刊:NatureCommunications发表时间:20190429影响因子:11.878在生物学研究中,DNA与蛋白质之间的互作是至关重要的,参与基因的表达、调控、复制、重组和修复以及RNA的转运、翻译和调控等多个过程,几乎涉及所有的生命活动。目前研究两者互作的方法很多,作者选择了传统的研究手段ChIP-seq,优化的CUT&RUN方法,以及新方法CUT&Tag共同研究组蛋白H3K27me3。通过比对实验结果,发现CUT&Tag有低的背景噪声以及强的信号。通过对H3K4me1修饰物进行分析,显示CUT&Tag的灵敏度高,实验可重复性好。北京文章 表观遗传组测序文章ctDNA甲基化不但可以作为tumsour分子标志物,还可用于追溯tumsour细胞的组织来源。
案例1:孕妇血浆中胎儿环状DNA的特征是:呈甲基化状态以及被clear原文:CharacteristicsofFetalExtrachromosomalCircularDNAinMaternalPlasma:MethylationStatusandClearance期刊:ClinicalChemistry影响因子:8.322近期,NIPT之父卢煜明教授团队开发了一种环状DNA甲基化分析的测序方案,通过对不同产后时间点的胎儿环状DNA含量的评估,研究了胎儿环状DNA的体外clear效率。作者还发现血浆中的胎儿环状DNA与母体环状DNA相比甲基化程度相对较低。此外,和胎儿线性DNA类似,胎儿环状DNA在分娩后从母血中迅速clear。总之,该团队基于转座酶和m5C位点酶学转化方法开发出了环状DNA甲基化测序技术,并揭示了孕妇血浆中的胎儿环状DNA甲基化状况,为环状DNA的深入研究及新型分子标志物的开发提供了新的技术手段。
ctDNA/cfDNA 之所以引起学界这么大的研究热情,与其在临床上广阔的应用前景是分不开的。相比于目前tumsor诊断当中普遍使用的组织活检,ctDNA 测序对患者的伤害小,且可以多次、实时地进行提取检测,在临床运用上具有极大的优势,有助于ai症的早发现、早医治,被誉为“液体切片活检”。ctDNA 的甲基化检测,同时结合了 ctDNA 测序于 DNA 甲基化测序的优势,在ai症检测方面提供更好的特异性和灵敏度。在 2021 年,已有 ctDNA/cfDNA 甲基化测序相关的商业化产品面市云序生物率先推出ctDNA甲基化测序服务,需1ng ctDNA既可进行测序。
样本要求样品类型:细胞、组织、体液、总gDNA或IP后DNA。其它类型样品请详询。样品量:a)细胞5×108b)组织100mgc)IP后DNA10ngd)gDNA3μg样品运输及保存:样品运输:样品置于1.5mLEppendorf管中,封口膜封好,干冰运输,DNA可用冰袋运输。样品保存:细胞样品或新鲜组织块切块,液氮冻存后-80℃保存;DNA样品短期内可-20℃,避免反复冻融。云序生物提供的MeDIP测序服务,将甲基化DNA免疫共沉淀技术(MeDIP)和高通量测序相结合,能够帮助客户快速地获取全基因组范围内的DNA甲基化图谱,并比较不同样品中的甲基化分布差异。后续进行文库构建与高通量测序,从而获得发生甲基化修饰的环状DNA。中国香港分析表观遗传组测序案例
这种形式的DNA被称为环状DNA (extrachromosomal circular DNA)。北京文章 表观遗传组测序文章
案例:hMeDIP-seq揭示了心机细胞发育与肥大过程中的基因表达与5hmC有关 DNA hydroxymethylation controls cardiomyocyte gene expression in development and hypertrophy[J].Greco C M, Kunderfranco P, Rubino M, et al . Nature Communications, 2016, 7:12418. 5-hmC(DNA羟甲基化)在基因体上富集能够激huo基因的转录调控,但对启动子和远端调节区的功能不太清楚。本文主要是以不同发育时间点和心肌肥大的心肌细胞为实验载体,主要剖析5-hmC在心肌细胞(CMC)基因组中的分布,并揭示了5-hmC在心脏发育和疾病中的作用机制。1)通过DNA羟甲基化测序,作者发现在心脏发育过程中,CMCs中的5-hmC在基因间区域逐渐减少,并向GB上富集(图1)。2)通过DNA羟甲基化和转录组关联分析,作者得出5-hmC是CMCs发育和肥大过程中的重要调控因子(图2)。北京文章 表观遗传组测序文章
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