云南云序生物测序RNA甲基化

LC-MS/MS检测核酸修饰水平实验原理： 云序生物建立了一种基于 LC-MS/MS 平台的核酸修饰分析方法，定量 4类 DNA 修饰（5-mdC、5-hmdC、5-fodC、6-mdA）和 9 类 RNA 修饰（m5C、 m6A、Am、Gm、Cm、Um、m1A、m7G、ac4C），为表观遗传研究提供理想的技术平台。 液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）能够很好的检测到极性高、稳定性差的化合物，并能够对物质进行精确的定量。LC-MS/MS 法是目前所有总体甲基化水平分析方法中能够对含量极低的修饰碱基进行准确定性定量的方法；而将 LCMS/MS 法与一定的样品前处理方法相结合，能够更好地对各类生物样品中的 DNA/RNA 修饰进行检测。RNA抽提，RNA质控，环状RNA特异性引物设计，环状RNA逆转录，环状RNA qPCR检测。云南云序生物测序RNA甲基化

样本要求 样品类型： 细胞、组织、基因组DNA。其它类型样品请详询。 样品量： a）细胞 2×107 b）组织 200 mg c）DNA：>=10 µg，溶于无菌水或 TE（PH = 8）（OD 260/280值应在1.7～2.0 之间；RNA 应该去除干净；不得有其它个体或其它物种的DNA污染）。 样品运输及保存： 样品运输：样品置于1.5mL Eppendorf管中，封口膜封好，干冰运输，DNA可用冰袋运输。 样品保存：细胞样品或新鲜组织块切块，液氮冻存后-80℃保存；DNA样品短期内可-20℃，避免反复冻融。云序测序全转录组云序生物的测序服务包括m6a,m5c,m7g,m1a服务。

目前对m6A RNA流行检测手段为MeRIP-Seq技术，云序生物提供成熟m6A RNA甲基化MeRIP-seq服务，技术原理如下： 将甲基化RNA特异性抗体与被随机打断的RNA的片段进行共孵育，抓取有甲基化修饰的片段进行测序；同时需要平行测序一个对照（Input）样本，对照样本只含有打断的RNA的片段，并不添加RNA甲基化特异性抗体与其共孵育。对照样本用于消除非特异性抓取甲基化片段的背景。对比免疫共沉淀(IP)样本和对照样本（Input）中的序列片段，将RNA甲基化修饰位点定位到转录组上，并根据RNA-seq数据，计算样本中RNA甲基化程度。

案例2: m5C RNA甲基化基因组分布图谱 原文：Distinct 5-methylcytosine profiles in poly(A) RNA from mouse embryonic stem cells and brain 期刊：Genome Biology 影响因子：13.21 近期刊登了解析RNA m5C在不同组织细胞的分布图谱相关文章。研究人员选取小鼠胚胎干细胞（ESC）和脑组织（n=3）作为实验样本，利用m5C RNA甲基化测序技术对两组样本中的总RNA和胞核RNA进行检测。结果表明，ESC中总RNA 5mC的分布频率比脑组织的分布频率更高。研究人员将m5C位点和不同的基因组区域（CDS, 5’-UTR, 3’-UTR等）进行了关联分析。结果表明，总RNA中m5C位点更倾向于分布在转录起始位点。脑组织和ESC中，3’-UTR区m5C的分布区别很大，这暗示着3’-UTR区的RNA m5C修饰可能与细胞功能和细胞类型密切相关。m6A环状RNA测序，云序生物提供成熟m6A RNA甲基化MeRIP-seq服务。

样本要求 样品类型 细胞、组织或RNA，其他样本类型请电询。 测序样品量 1.单碱基测序方式： a) 细胞：≥1×108 b) 组织：500 mg - 5 g c) RNA：100 μg - 300 μg 2. MeRIP测序方式： a) 细胞：≥2×107 b) 组织：100mg - 1g c) RNA：30 μg - 300 μg d) 超微量满足500 ng - 30 μg 样品运输及保存 样品运输：样品置于1.5mL离心管中，封口膜封好，干冰运输。 样品保存：细胞样品或新鲜组织块可用TRIZOL或RNA保护剂处理，液氮冻存后-80℃保存；RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中，-80℃保存，避免反复冻融。云序拥有专业的生物信息学团队，开发了高效识别分析环状DNA的算法。陕西测序平台

环状RNA的表达具有组织和疾病特异性，与组织发育、疾病的发生和发展密切相关。云南云序生物测序RNA甲基化

组织细胞环状DNA测序服务云序组织细胞环状DNA测序服务（Circle-seq），采用多种方法高效地富集和扩增环状DNA，极大地提高了环状DNA的检出率。富集后，通过NGS测序高通量地检测细胞中所有的环状DNA分子。并通过严谨的环状DNA生信流程，实现了对环状DNA准确的识别和详细的基因注释。近日，Nature杂志上发表了颠覆性研究成果：在tumour中，主要的cancer基因转录本是直接来自于环状DNA的，而环状DNA的染色质是高度开放的，环状DNA的cancer基因能够大量表达，同时缺乏丝粒，导致不遵照孟德尔定律进行遗传，这种特性使得环状DNA是驱动tumour异质性的重要机制。云南云序生物测序RNA甲基化