m6A LncRNA测序:案例2. lincRNA 1281上的m6A 甲基化影响细胞分化 原文:N6-Methyladenosine modification of lincRNA 1281 is critically required for mESC differentiation potential 期刊:Nucleic Acids Research 影响因子:11.56 同济大学康九红团队研究发现在mESC细胞中,甲基化转移酶Mettl3能够调控lincRNA 1281发生甲基化,并且与干细胞分化能力直接相关。揭示此过程主要发生在胞浆,且由let-7能够竞争性结合linc1281,从而降低其表达量,从机制上解释了m6A在不影响到表达水平的情况下如何影响生物学功能的问题。RNA抽提,RNA质控,环状RNA特异性引物设计,环状RNA逆转录,环状RNA qPCR检测。云南测序文章
案例1:母体血浆中染色体外环状DNA的鉴定与特性分析 原文:Identification and characterization of extrachromosomal circular DNA in maternal plasm 期刊:Proc Natl Acad Sci 影响因子:11.201 作者观察到在孕妇的血浆中存在染色体外环状DNA (环状DNA),并通过限制性内切酶和Tn5转座酶处理后的改良的测序方法,在孕妇的血浆中鉴定出了环状DNA分子。他们发现血浆的环状DNA分子比线性的长,在这些环状DNA分子中,胎儿来源的环状DNA短于母体来源的环状DNA。此外,环状DNA的闭合圆形结构可能允许抗外切酶,因此这些分子比它们的线性对应物具有更高的稳定性。这些特性为环状DNA的研究和生物标志物的开发提供了机会。新疆测序microRNA甲基化云序生物为您完成m5C RNA-Seq全套实验服务,数据准确。
研究还发现,m6Am 修饰是一个可逆的动态修饰,当细胞遭遇热激、低氧等应激性刺激时 m6Am 水平上升,说明 m6Am 可能在细胞应激反应中扮演了重要角色。近来也有研究发现,除了 mRNA 的较早编码核苷酸残基以外,在 snRNA 内部也有 m6Am 甲基化修饰的分布。虽然 m6Am 修饰早在 1975 年就已经被人类发现,但由于检验手段的匮乏,科学家难以区分出 m6A 修饰与 m6A 修饰,因此直到近年来 m6Am 测序技术逐渐发展成熟,才为进一步深入研究 m6Am 这一重要的 RNA 修饰铺平了道路。
环状DNA形成的机理 目前研究表明,环状DNA是从染色体上断裂、环化或者额外复制产生的序列,其剪切加工机理主要提出有两种可能:(1)通过染色体异位同源重组环化(intrachromatid ectopic homologous recombination,HR);(2)通过非同源染色体末端连接环化(nonhomologous end-joining,NHEJ)。环状DNA形成是一个复杂的过程,更多环化方式有待探索。针对血清血浆微量样品,云序生物参考卢煜明教授团队开发的方法,酶切去除线性DNA后,利用Tn5转座酶,打开环状DNA环状结构并同时在DNA的片段两端加上接头,进行建库及测序。RNA抽提,RNA质控,环状RNA特异性引物设计,环状RNA逆转录。
组织细胞环状DNA测序: 游离于染色体基因组之外的DNA (extrachromosomal DNA,ecDNA)被发现常常以环状的形式存在,这种形式的DNA被称为环状DNA (extrachromosomal circular DNA,eccDNA)。目前也习惯将巨大的环状DNA(>1Mb)称为ecDNA, 而将相对较小的环状DNA称为eccDNA。目前研究表明,环状DNA是从染色体上断裂、环化或者额外复制产生的序列,其剪切加工机理主要提出有两种可能:(1)通过染色体异位同源重组环化(intrachromatid ectopic homologous recombination,HR);(2)通过非同源染色体末端连接环化(nonhomologous end-joining,NHEJ)。环状DNA形成是一个复杂的过程,更多环化方式有待探索。云序生物可进一步提供高精度的O8G氧化图谱。四川研究测序
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