湖南服务外泌体分析

目前，外泌体的分离多采用超速离心、磁珠免疫捕获、沉淀或过滤三种方法。磁珠免疫捕获：利用外泌体表面特有的表面标记物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合，即可将外泌体吸附并分离出来。磁珠法具有特异性高、操作简便、不影响外泌体形态完整等优点，但是效率低，外泌体生物活性易受pH和盐浓度影响，不利于下游实验，难以普遍普及。人体中几乎所有类型的细胞都能产生外泌体，它普遍存在于组织细胞间隙及体液中。以往认为外泌体属于细胞“垃圾”，且因此低估它的重要作用。虽然外泌体在30多年前被发现，但是直到较近才开始意识到其重要性。外泌体富含胆固醇和鞘磷脂。湖南服务外泌体分析

除此之外，细胞还可以释放膜囊泡，外泌体与微泡就是其中两种，二者相似但形成方式不同：外泌体是细胞内内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中的膜囊泡，而微泡则是细胞出芽与细胞膜融合后直接脱落形成的囊泡，且外泌体大小均一， 直径在40~100 nm，其大小取决于其起源部位以及细胞中的脂质双层结构；而微泡大小不一，直径在50 ~1000 nm之间。外泌体的组成：外泌体主要含有融合蛋白和转运蛋白、热休克蛋白(HSP 70)、CD类蛋白以及磷脂酶和其他脂质相关蛋白，但是不同来源的外泌体的组成有差异。陕西测序外泌体LncRNA测序研究外泌体在这些过程中的作用影响，发表文章的周期会较长，但是相对的，影响因子也高，很多都在10分以上。

H.Valadi等发现，细胞之间可以通过外泌体中的RNA来交换遗传物质。这意味着细胞可以通过外泌体影响另外一个细胞，甚至可以把自己的基因强加给另外一个细胞。研究人员逐渐对小小的外泌体产生了极大的好奇。他们发现，tumour细胞的外泌体与正常细胞的外泌体之间存在差异，tumour的外泌体会促进tumour的生长和转移，tumour周围组织细胞分泌的外泌体具备杀伤tumour细胞的能力，等等。2013年的诺贝尔生理或医学奖颁给了三位科学家，他们分别是美国科学家James E. Rothman和Randy W. Schekman，德国科学家Thomas C. Südhof，以表彰他们发现细胞内部囊泡（外泌体等）运输调控机制。使外泌体的研究达到全新的高度。就外泌体的研究方向而言，干细胞、免疫、microRNA、靶向给药、ai症的诊断及医治等都是热门研究领域。

外泌体中包含多种miRNA，调控靶细胞生理活性，本文发现脂肪组织巨噬细胞（adipose tissue macrophages，ATMs）分泌的外泌体中含有miRNA并可以转移到胰岛素的靶细胞中，从而调节靶细胞对胰岛素的敏感性以及体内的总糖代谢稳态。Olefsky团队从肥胖小鼠脂肪组织内分离出巨噬细胞，再收集细胞里的外泌体，用它们处理体型瘦的健康小鼠，发现接受了外源外泌体的小鼠虽然体重依然正常，但却出现肥胖诱导型胰岛素抵抗症状。外泌体可被大多数细胞分泌，并分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液中。外泌体中不仅包含蛋白质成分，还包括一些RNA成分，细胞样品或新鲜组织块可用TRIZOL或RNA保护剂处理，液氮冻存后-80℃保存。

MSCs是干细胞家族的重要成员，属于多能干细胞，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。人间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，还能向受损组织趋化。MSCs通过旁分泌方式释放细胞因子，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器guan损伤修复，是一种有前景的能够用于疾病医治的干细胞来源。近年来,研究学者相继发现子宫液、输卵管液、胎盘中也存在外泌体。广西研究外泌体LncRNA测序

免疫磁珠法：可以保证外泌体形态的完整，特异性高、操作简单，但生理性盐浓度会影响外泌体生物活性。湖南服务外泌体分析

超过4 600种蛋白质与外泌体有关。外泌体蛋白有以下几类：①外泌体中常见的蛋白质多与其生物发生机制有关，外泌体含有的细胞质蛋白，如膜蛋白和RAB蛋白，可以促进MVBs与细胞膜的融合及外泌体的释放；Tsg-101及附属蛋白质Alix参与ESCRT过程，促进内体膜的凹陷。②外泌体含有参与抗原呈递的蛋白质，如CD1、MHCⅠ和MHCⅡ，其在免疫调节中发挥重要作用，MHCⅠ还参与向T细胞呈递抗原的生理过程。外泌体表面还存在热休克蛋白，如HSP70和HSP90，促进了抗原肽与MHCⅠ及MHCⅡ的结合。③外泌体含有信号转导蛋白，如G蛋白和蛋白激酶。④外泌体含有丰富的蛋白水解酶，这表明外泌体能够促进细胞转移。⑤外泌体中还含有细胞质微管蛋白、肌动蛋白和肌动蛋白结合蛋白。但目前未发现外泌体中含有与内质网、高尔基体和细胞核相关的蛋白质。湖南服务外泌体分析

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