湖北修饰外泌体文章

如今外泌体分析用于临床诊断和医治监控显然是一个重要领域。特定的跨膜蛋白信号可以识别tumour特异性的外泌体，而外泌体内蛋白的改变可以用于推断tumour细胞对医治措施的反应。虽然外泌体有如此大的临床价值，但是临床日常外泌体分析却十分困难，这是因为目前缺少足够灵敏且快速的试验平台，尤其是进行外泌体蛋白质分析。 目前人们利用电镜来分析外泌体的大小和形态，利用流式细胞仪来分析细胞表面标记，通过Western blot和ELISA等方法对蛋白进行分析，或通过qPCR和新一代测序NGS来分析RNA。常规的转录组测序采用Oligo d(T)法纯化带Poly(A)尾巴的RNA分子。湖北修饰外泌体文章

外泌体于1983年被发现，是由于细胞膜内吞形成内体，内体限制膜发生多处凹陷，向内出芽形成微囊泡，从而形成的具有动态亚细胞结构的多囊泡体。大多数类型的细胞均可分泌外泌体。构成外泌体的主要成分为蛋白质、核酸和脂质。外泌体有多种分泌途径，对细胞间通信、疾病的传播及组织修复具有重要的调节作用。外泌体与受体细胞的结合方式多种多样，外泌体可以将膜蛋白或其内容物转移至受体细胞，也可以直接与受体细胞膜融合；此外，外泌体上的跨膜蛋白还可以直接作用于受体细胞膜表面的信号分子。外泌体普遍存在于生物体的免疫应答反应中，外泌体可以通过介导促炎症反应来促进免疫反应，tumour细胞分泌的外泌体还可以抑制免疫反应。青海平台外泌体mRNA测序外泌体可提供特殊的核酸且起到运输功能。

超过4600种蛋白质与外泌体有关。外泌体蛋白有以下几类：①外泌体中常见的蛋白质多与其生物发生机制有关，外泌体含有的细胞质蛋白，如膜蛋白和RAB蛋白，可以促进MVBs与细胞膜的融合及外泌体的释放；Tsg-101及附属蛋白质Alix参与ESCRT过程，促进内体膜的凹陷。②外泌体含有参与抗原呈递的蛋白质，如CD1、MHCⅠ和MHCⅡ，其在免疫调节中发挥重要作用，MHCⅠ还参与向T细胞呈递抗原的生理过程。外泌体表面还存在热休克蛋白，如HSP70和HSP90，促进了抗原肽与MHCⅠ及MHCⅡ的结合。③外泌体含有信号转导蛋白，如G蛋白和蛋白激酶。④外泌体含有丰富的蛋白水解酶，这表明外泌体能够促进细胞转移。⑤外泌体中还含有细胞质微管蛋白、肌动蛋白和肌动蛋白结合蛋白。但目前未发现外泌体中含有与内质网、高尔基体和细胞核相关的蛋白质。

外泌体在细胞间通讯中发挥重要作用，可以影响细胞的多种功能，包括细胞因子的产生、细胞增殖、细胞凋亡和代谢等。目前认为，外泌体主要通过以下方式与受体细胞结合：①外泌体将膜蛋白或其内容物转移至受体细胞，被受体细胞膜完全吞噬，这一过程需要非常规脂质LBPA和附属蛋白质Alix；②外泌体膜与受体细胞膜直接融合；③外泌体上的跨膜蛋白直接作用于受体细胞膜表面的信号分子。例如，滤泡树突细胞分泌的外泌体携MHC-跨膜蛋白，其可刺激B淋巴细胞和T淋巴细胞表面的信号分子。外泌体与受体细胞以何种方式结合取决于外泌体的大小及外泌体携带的物质。环状RNA表达具有组织和疾病特异性，与组织发育、疾病发生和发展密切相关。

目前，外泌体的分离多采用超速离心、磁珠免疫捕获、沉淀或过滤三种方法。磁珠免疫捕获：利用外泌体表面特有的表面标记物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合，即可将外泌体吸附并分离出来。磁珠法具有特异性高、操作简便、不影响外泌体形态完整等优点，但是效率低，外泌体生物活性易受pH和盐浓度影响，不利于下游实验，难以普遍普及。人体中几乎所有类型的细胞都能产生外泌体，它普遍存在于组织细胞间隙及体液中。以往认为外泌体属于细胞“垃圾”，且因此低估它的重要作用。虽然外泌体在30多年前被发现，但是直到较近才开始意识到其重要性。近年来,研究学者相继发现子宫液、输卵管液、胎盘中也存在外泌体。上海分析外泌体miRNA测序

对环状RNA的研究将不再局限于人、小鼠和大鼠等常见物种。湖北修饰外泌体文章

大多数常规的膜出芽过程是使膜从细胞器变形到细胞质中，而外泌体是由于细胞膜内吞形成内体，内体限制膜发生多处凹陷，向内出芽形成微囊泡(intraluminal vesicles，ILVs)，从而转变为具有动态亚细胞结构的多囊泡体(multi-vesicle bodys，MVBs)，即晚期内体。MVBs可以在内体限制膜处通过至少2种机制产生：一种是内吞体分选转运复合体机制(endosomal sorting complex required for transport，ESCRT)，另一种是非依赖性的ESCRT机制。ESCRT机制由一组胞质蛋白复合物发挥作用，其能识别泛素化修饰的膜蛋白。湖北修饰外泌体文章

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