贵州测序外泌体全转录测序

2015年JHuan等人证实了急性髓细胞白血病（AML）的外泌体在白血病的骨髓微环境中具有抑制造血干细胞的功能。同年WANGY等人发现诱导多能干(iPS)细胞的外泌体可以在心肌细胞受到急性心肌缺血（MIR）影响时，给心肌细胞传送保护信号。 目前有关外泌体的研究，主要集中在外泌体颗粒的提取、纯化和内容物分析上。其中，外泌体的粒径表征和浓度信息是极为重要的参数。人体中几乎所有类型的细胞都能产生外泌体，它普遍存在于组织细胞间隙及体液中。以往认为外泌体属于细胞“垃圾”，且因此低估它的重要作用。虽然外泌体在30多年前被发现，但是直到较近才开始意识到其重要性。色谱法：此种方法分离出的外泌体大小均一，但设备特殊，应用不普遍。贵州测序外泌体全转录测序

H.Valadi等发现，细胞之间可以通过外泌体中的RNA来交换遗传物质。这意味着细胞可以通过外泌体影响另外一个细胞，甚至可以把自己的基因强加给另外一个细胞。研究人员逐渐对小小的外泌体产生了极大的好奇。他们发现，tumour细胞的外泌体与正常细胞的外泌体之间存在差异，tumour的外泌体会促进tumour的生长和转移，tumour周围组织细胞分泌的外泌体具备杀伤tumour细胞的能力，等等。2013年的诺贝尔生理或医学奖颁给了三位科学家，他们分别是美国科学家James E. Rothman和Randy W. Schekman，德国科学家Thomas C. Südhof，以表彰他们发现细胞内部囊泡（外泌体等）运输调控机制。使外泌体的研究达到全新的高度。就外泌体的研究方向而言，干细胞、免疫、microRNA、靶向给药、ai症的诊断及医治等都是热门研究领域。辽宁测序外泌体mRNA测序外泌体鉴定方式：主要有四种方法：透射电子显微镜（TEM）、Nanosight、Western Blot和流式细胞术。

外泌体的内容物可以通过生物工程手段修饰。其中，将选择的蛋白内容物与外泌体的EV-sorting proteins通过细胞工程融合是较常用的方法。这种方法既可以在腔内储存可输送到靶细胞的内容物，也可以让内容物与靶细胞表面受体结合来增强它们的医治信号特性或靶向能力。因此，Silva等在单外泌体水平上，通过分析工程化外泌体技术对不同外泌体的EV-sorting proteins在促进蛋白内容物的装载效率进行了评估。外泌体可被大多数细胞分泌，并分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液中。外泌体中不仅包含蛋白质成分，还包括一些RNA成分。

流式细胞仪不仅可以检测囊泡的大小、数量，而且通过荧光标记可以检测囊泡的来源，将囊泡进行分类，因此，流式细胞仪是进行囊泡快速、高通量、多参数检测的较优de选择。但是，传统流式细胞仪无法测量＜300nm的外泌体，因此很难进行精确地定量和定性分析。 纳米颗粒跟zong分析技术（Nanosight Tracking Analysis，NTA）是一种比较新颖的表征纳米颗粒的方法，它可直接并实时观测纳米颗粒。NTA 通过光学显微镜收集纳米颗粒的散射光信号，拍摄一段纳米颗粒在溶液中做布朗运动的影像，对每个颗粒的布朗运动进行追踪和分析，从而计算出纳米颗粒的流体力学半径和浓度。环状RNA不易降解，可做为新型疾病分子标志物。

目前，外泌体的分离多采用超速离心、磁珠免疫捕获、沉淀或过滤三种方法。 超速离心：耗时耗力，往往需要8-30个小时；每次较多只能处理6个样品；需要大量的起始材料；产量不高。需一台超速离心机。 将欲提取的细胞培养上清液10ml，在4 ℃的环境下，300×g 10min，2000×g 20min，弃沉淀，去除细胞；然后 l0,000×g 30min ，弃沉淀，去除亚细胞成分；再用10,000×g 60min，弃掉上清液，较后所得沉淀既为exosome ，用30ml PBS 溶液重新悬浮沉淀物，混匀后再以10,000×g 60min，用 l ml PBS溶液悬浮沉淀物提纯的exosome 溶液分别装入eppendorf 管内，置于-80℃冰箱内保存备用。外泌体核酸包括诸多种类的long RNAs和以microRNA为dai表的small RNAs。河北研究外泌体文章

过滤离心：这种操作简单、省时，不影响外泌体的生物活性，但同样纯度不足。贵州测序外泌体全转录测序

如今外泌体分析用于临床诊断和医治监控显然是一个重要领域。特定的跨膜蛋白信号可以识别tumour特异性的外泌体，而外泌体内蛋白的改变可以用于推断tumour细胞对医治措施的反应。虽然外泌体有如此大的临床价值，但是临床日常外泌体分析却十分困难，这是因为目前缺少足够灵敏且快速的试验平台，尤其是进行外泌体蛋白质分析。 目前人们利用电镜来分析外泌体的大小和形态，利用流式细胞仪来分析细胞表面标记，通过Western blot和ELISA等方法对蛋白进行分析，或通过qPCR和新一代测序NGS来分析RNA。贵州测序外泌体全转录测序

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