重庆技术外泌体研究

外泌体蛋白有以下几类：外泌体中常见的蛋白质多与其生物发生机制有关，外泌体含有的细胞质蛋白，如膜蛋白和RAB蛋白，可以促进MVBs与细胞膜的融合及外泌体的释放；Tsg-101及附属蛋白质Alix参与ESCRT过程，促进内体膜的凹陷。外泌体含有参与抗原呈递的蛋白质，如CD1、MHCⅠ和MHCⅡ，其在免疫调节中发挥重要作用，MHCⅠ还参与向T细胞呈递抗原的生理过程。外泌体表面还存在热休克蛋白，如HSP70和HSP90，促进了抗原肽与MHCⅠ及MHCⅡ的结合。外泌体含有信号转导蛋白，如G蛋白和蛋白激酶。外泌体含有丰富的蛋白水解酶，这表明外泌体能够促进细胞转移。外泌体中还含有细胞质微管蛋白、肌动蛋白和肌动蛋白结合蛋白。但目前未发现外泌体中含有与内质网、高尔基体和细胞核相关的蛋白质。外泌体中携带有多种蛋白质、脂类、RNA等重要信息。重庆技术外泌体研究

外泌体的分离方法包括差速离心法、ExoQuick外泌体快速提取试剂盒法、免疫亲和沉降法、蔗糖密度梯度-超速离心法和微流体分离法等。其中差速离心法是较常用的外泌体分离方法，即通过较低的离心速度从培养基中分离出颗粒较大的物质，然后外泌体、小胞外囊泡及蛋白质再以非常高的速度(100 000×g)离心产生沉淀。因此，差速离心只能富集而不能纯化外泌体。富集的外泌体、小胞外囊泡及蛋白质通过生物化学、质谱或电子显微镜等相关技术进行物理、化学及生物表征，从而得到进一步鉴别。福建技术外泌体LncRNA测序云序生物提供外泌体LncRNA测序，同时分析样品中全部外泌体来源LncRNA和mRNA。

除此之外，细胞还可以释放膜囊泡，外泌体与微泡就是其中两种，二者相似但形成方式不同：外泌体是细胞内内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中的膜囊泡，而微泡则是细胞出芽与细胞膜融合后直接脱落形成的囊泡，且外泌体大小均一， 直径在40~100 nm，其大小取决于其起源部位以及细胞中的脂质双层结构；而微泡大小不一，直径在50 ~1000 nm之间。外泌体的组成：外泌体主要含有融合蛋白和转运蛋白、热休克蛋白(HSP 70)、CD类蛋白以及磷脂酶和其他脂质相关蛋白，但是不同来源的外泌体的组成有差异。

另外，MSC来源的外泌体还可以有效地促进骨折的愈合、保护修复肾损伤，心肌衰弱、及后肢局部缺血的医治，以及调节促进肌肉的再生等。动物实验中，应用MSC外泌体对于卵巢细胞衰老的医治中，起到了明显的效果。更有体外细胞实验验证，人脐带间充质干细胞分泌的外泌体能够有效抑制顺铂诱导的大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡，提高细胞的生存率。 与传统的干细胞疗法不同，外泌体不是活细胞，因此在被注射到身体的受损伤部位后，不会发展成为ai细胞。因此，外泌体可能作为替代干细胞医治的新策略正在迅速获得重视，并且能够克服细胞医治中的诸多风险和困难。外泌体可促进生物体免疫应答反应。

大多数常规的膜出芽过程是使膜从细胞器变形到细胞质中，而外泌体是由于细胞膜内吞形成内体，内体限制膜发生多处凹陷，向内出芽形成微囊泡(intraluminal vesicles，ILVs)，从而转变为具有动态亚细胞结构的多囊泡体(multi-vesicle bodys，MVBs)，即晚期内体。MVBs可以在内体限制膜处通过至少2种机制产生：一种是内吞体分选转运复合体机制(endosomal sorting complex required for transport，ESCRT)，另一种是非依赖性的ESCRT机制。ESCRT机制由一组胞质蛋白复合物发挥作用，其能识别泛素化修饰的膜蛋白。过滤离心：这种操作简单、省时，不影响外泌体的生物活性，但同样纯度不足。山东技术外泌体LncRNA测序

多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。重庆技术外泌体研究

目前，外泌体的分离多采用超速离心、磁珠免疫捕获、沉淀或过滤三种方法。磁珠免疫捕获：利用外泌体表面特有的表面标记物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合，即可将外泌体吸附并分离出来。磁珠法具有特异性高、操作简便、不影响外泌体形态完整等优点，但是效率低，外泌体生物活性易受pH和盐浓度影响，不利于下游实验，难以普遍普及。人体中几乎所有类型的细胞都能产生外泌体，它普遍存在于组织细胞间隙及体液中。以往认为外泌体属于细胞“垃圾”，且因此低估它的重要作用。虽然外泌体在30多年前被发现，但是直到较近才开始意识到其重要性。重庆技术外泌体研究

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