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如今外泌体分析用于临床诊断和医治监控显然是一个重要领域。特定的跨膜蛋白信号可以识别tumour特异性的外泌体,而外泌体内蛋白的改变可以用于推断tumour细胞对医治措施的反应。虽然外泌体有如此大的临床价值,但是临床日常外泌体分析却十分困难,这是因为目前缺少足够灵敏且快速的试验平台,尤其是进行外泌体蛋白质分析。 目前人们利用电镜来分析外泌体的大小和形态,利用流式细胞仪来分析细胞表面标记,通过Western blot和ELISA等方法对蛋白进行分析,或通过qPCR和新一代测序NGS来分析RNA。常规的转录组测序采用Oligo d(T)法纯化带Poly(A)尾巴的RNA分子。服务外泌体研究

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超速离心法既耗时又费力。现在您可以通过使用灵活可控的总外泌小体分离试剂,从不同的起始样本中方便地富集完整的外泌小体。这些试剂及其配套的试验方案完美适用于普遍的实验计划,包括小输入样本量和多种样本处理实验。从培养细胞中富集的总外泌小体(使用总外泌小体分离试剂或超速离心)可以通过免疫磁性捕获法进一步纯化为亚组分。可使用基于Dynabeads?的CD63特异性试剂,或将链霉亲和素试剂与特定的生物素化抗体结合使用,可基于表面抗原的免疫反应纯化得到任何所需的亚组分。广东服务外泌体全转录测序环状RNA不易降解,可做为新型疾病分子标志物。

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大多数常规的膜出芽过程是使膜从细胞器变形到细胞质中,而外泌体是由于细胞膜内吞形成内体,内体限制膜发生多处凹陷,向内出芽形成微囊泡(intraluminal vesicles,ILVs),从而转变为具有动态亚细胞结构的多囊泡体(multi-vesicle bodys,MVBs),即晚期内体。MVBs可以在内体限制膜处通过至少2种机制产生:一种是内吞体分选转运复合体机制(endosomal sorting complex required for transport,ESCRT),另一种是非依赖性的ESCRT机制。ESCRT机制由一组胞质蛋白复合物发挥作用,其能识别泛素化修饰的膜蛋白。

外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡(30-150nm),现今,其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年,外泌体于绵羊网织红细胞中被发现,1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体,且外泌体天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。外泌体中携带有多种蛋白质、脂类、RNA等重要信息。

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除此之外,细胞还可以释放膜囊泡,外泌体与微泡就是其中两种,二者相似但形成方式不同:外泌体是细胞内内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中的膜囊泡,而微泡则是细胞出芽与细胞膜融合后直接脱落形成的囊泡,且外泌体大小均一,直径在40~100nm,其大小取决于其起源部位以及细胞中的脂质双层结构;而微泡大小不一,直径在50~1000nm之间。外泌体的组成:外泌体主要含有融合蛋白和转运蛋白、热休克蛋白(HSP70)、CD类蛋白以及磷脂酶和其他脂质相关蛋白,但是不同来源的外泌体的组成有差异。外泌体在哺乳期的免疫调节过程中起到重要的作用。上海云序外泌体平台

外泌体(Exosomes)是一种直径在40-100 nm的圆形单层膜结构,是细胞外泌囊泡中体积较小的一种。服务外泌体研究

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