样本要求:样品类型:组织、细胞、体液或RNA样品。其它类型样品请详询。样品量:细胞: > 1×108,组织: > 5 g ,总RNA:> 300 μg (OD260/280≥1.8;OD260/230≥1.5;无明显降解,电泳检测样品特征性条带完整清晰,无明显弥散或拖尾 28S:18S≥1.5或者RIN≥7),样品运输及保存:样品运输:样品置于1.5mL离心管中,封口膜封好,干冰运输。样品保存:细胞样品或新鲜组织块(切成5-10 mg的小块),可用TRIZOL或RNA保护剂处理,液氮冻存后,-80℃保存,RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中,-80℃保存,样品保存期间避免反复冻融。云序m1A RNA-seq采用商业化m1A抗体,可特异性富集m1A修饰片段。保定m1Apri-miRNA测序
为了研究人细胞转录组中的m1A修饰,伊成器课题组首先利用高分辨质谱对mRNA中的m1A修饰进行定量,发现其guang泛存在于各种细胞系中。该研究继而通过化学生物学、高通量测序等手段,发展了“m1A-ID-seq” 一种结合抗体富集和特异性酶促反应的m1A RNA甲基化测序新技术。利用这一技术,该研究成功实现了人细胞系全转录组水平的高分辨率m1A检测,鉴定出901个含有m1A修饰的转录本,并且发现m1A呈现强烈的5’非转录区分布特异性。云序生物是一家比较不错的做RNA甲基化的公司,他们的RNA甲基化口碑很好,宝坻区m1A云序生物为您完成从m1A RNA-seq富集、文库制备、上机测序到数据分析的整套服务流程。
02 检测整体m1A RNA修饰水平, LC-MS/MS检测整体RNA修饰水平,准确高效,可以实现一次检测,9类修饰水平检测,一步到位。03 m1A RNA修饰上游酶的筛选, m1A RNA修饰相关酶PCR芯片,寻找上游直接调控m1A RNA甲基化的甲基转移酶。04 m1A RNA修饰靶基因验证,meRIP-qPCR,云序提供各类不同修饰的meRIP-qPCR服务,可针对mRNA,lncRNA,环状RNA等不同类型的RNA分子进行检测,低通量验证RNA修饰靶基因表达水平。m1A RNA甲基化是一类新发现的RNA甲基化,即RNA分子腺嘌呤第1位氮原子上的甲基化修饰(N1-methyladenosine,m1A)。
MeRIP-Seq技术服务由上海云序生物科技有限公司提供,是在已发表实验方法的基础上开发而来,方法简述如下:片段化的RNA与m1A抗体在IPP缓冲液中4度共孵育2小时。反应混合物进一步用protein A磁珠(Thermo Fisher)在4度免疫沉淀2小时。然后用游离的m1A腺苷类似物洗脱磁珠上结合的RNA。洗脱的RNA进一步通过Trizol试剂(Thermo Fisher)进行抽提。抽提纯化的RNA通过RNA建库试剂盒(NEB)建库,并在Illumina Hiseq测序仪上进行双端150bp测序。继m6A、m5C、m1A之后,云序隆重推出多款RNA新修饰类型。
直到2016年,来自芝加哥大学等处的科学家在国际杂志Nature上发表的一项研究论文,该研究通过m1A RNA甲基化测序和RIP测序技术在真核生物mRNA中对m1A甲基化作用进行jiao全的分析,揭示了一种小型的化学修饰可以明显增强基因向蛋白质的表达过程。这种小型的修饰具有进化保守性,而且在人类、啮齿类动物及酵母中普遍存在,但其位置以及对基因表达的效应却可以反应一种新形式的表观转录组学控制。这项研究发现为生物学世界提供了一种新的视野。样品运输:样品置于1.5mL离心管中,封口膜封好,干冰运输。邯郸m1AlncRNA测序
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生物化学表征分析显示:ALKBH1在体外或者细胞内对tRNA中的m1A甲基化都具有去甲基化活性。同时展示了ALKBH1控制tRNA iMet以影响翻译起始,并且m1A甲基化的tRNA优先被招募到多核糖体以促进翻译伸长。ALKBH1介导的tRNA去甲基化控制在翻译中具靶标的效用翻tRNAs,从而直接影响蛋白质的合成。这个过程是动态的,并被人类细胞用于对葡萄糖剥夺作出反应。这一发现打开了一个潜在的可逆tRNA甲基化影响基因表达的新范式。云序生物是一家比较不错的做RNA甲基化的公司,他们的RNA甲基化口碑很好,保定m1Apri-miRNA测序