延庆区m1A分析

1. m1A-MAP技术及其在tRNA中的验证,利用m1A会导致错配的特性，采用去甲基化酶AlkB来实现m1A去甲基化，对比(-)去甲基化酶和(+)去甲基化酶的结果，捕捉碱基突变的信号，来实现m1ARNA修饰位点单碱基分辨率的鉴定，为了增加检测灵敏度，作者还利用抗体富集的方式来特异性富集m1A的RNA的片段，作者将这个方法命名为m1A-MAP。在哺乳动物中，已知tRNA第9，14和58位会发生m1ARNA修饰，通过这个技术，细胞质中tRNAAsp(GUC)第9位及tRNA第58位都被检测到m1ARNA修饰，以上结果都证实该方法确实可有效单碱基分辨率的鉴定m1ARNA修饰位点。细胞样品或新鲜组织块（切成5-10 mg的小块），可用TRIZOL或RNA保护剂处理。延庆区m1A分析

RNA甲基化修饰的相关研究可以说是当前整个生命科学领域热门的方向之一，亮点文章频出，着实让人有些目不暇接。日益增多的发表文章、特别是高分文章说明，这个领域现在正在迅速成为大家关注的焦点。RNA甲基化修饰类型很多，目前热门的有三种，分别是：m6A RNA甲基化﹑m5C RNA甲基化﹑m1A RNA甲基化。而m1A RNA甲基化是一个新进入大家的视野的RNA甲基化修饰类型，即 RNA 分子腺嘌呤第 1 位氮原子上的甲基化修饰（N1-methyladenosine，m1A）。云序生物是一家比较不错的做RNA甲基化的公司，他们的RNA甲基化口碑很好，河北区m1ARNA甲基化测序云序技术优势，可单碱基分辨率检测m1A甲基化修饰。

MeRIP-Seq技术服务由上海云序生物科技有限公司提供，是在已发表实验方法的基础上开发而来，方法简述如下：片段化的RNA与m1A抗体在IPP缓冲液中4度共孵育2小时。反应混合物进一步用proteinA磁珠（ThermoFisher）在4度免疫沉淀2小时。然后用游离的m1A腺苷类似物洗脱磁珠上结合的RNA。洗脱的RNA进一步通过Trizol试剂（ThermoFisher）进行抽提。抽提纯化的RNA通过RNA建库试剂盒（NEB）建库，并在IlluminaHiseq测序仪上进行双端150bp测序。

2.m1A-MAP揭示人全转录组m1A修饰,作者通过m1A-MAP在人全转录组水平上进行检测，发现了740个m1A修饰位点，其中473个位点位于mRNA和lncRNA，大部分位于5’-UTR。通过比对SNP数据库，作者还排除了假阳性结果。另外，作者通过多核糖体图谱还发现5’-UTR区域发生m1A与mRNA翻译效率呈正相关，且这种正相关性在cap+1位置上更xian著，但在CDS区域和3’-UTR区都没有出现。这些发现不同位置的m1A修饰可能发挥不同的生物学功能。通过motif分析，作者发现m1A修饰位点偏好GUUCRA序列。另外，作者发现TRMT6/61A不仅是tRNAm1A甲基化酶复合物，也是mRNA上发生m1A修饰所需要的酶。m1a环状RNA，云序生物做的比较好，我做了。

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RNA甲基化富集峰分布图。延庆区m1A分析

这一分布规律与m6A（真核细胞mRNA中广fan的甲基化修饰）截然不同，后者主要集中在mRNA的靠后一个外显子上，并且对mRNA的翻译、定位、稳定性等多个过程进行调控。该研究进一步鉴定了m1A修饰的一个去甲基化酶ALKBH3，并发现了转录组中ALKBH3的近千个作用位点。因此，该研究不但揭示了m1A的广fan存在、绘制了转录组中m1ARNA修饰的谱图，也为m1A修饰参与基因表达调控的研究提供了重要工具。云序生物是一家比较不错的做RNA甲基化的公司，他们的RNA甲基化口碑很好，延庆区m1A分析

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