脂质体转染是一种常用的将外源基因导入细胞的方法,脂质体大小:脂质体的大小也可能影响转染效率。较小的脂质体可能更容易进入细胞,但可能携带的 DNA 量较少。较大的脂质体可能携带更多的 DNA,但可能更难进入细胞。研究发现,阳离子脂质体的大小与转染效率之间存在一定的关系。随着脂质体尺寸的增加,转染的主要途径可能从网格蛋白介导的内吞作用转变为脂筏介导的内吞作用,同时也可能观察到巨胞饮作用。这种变化可能会影响脂质体在细胞内的运输和释放,从而影响转染效率。随着寡核苷酸生物合成产业的发展,不同类型的修饰寡核苷酸也被引入市场,以提高小RNA寡核苷酸转染的效率。江苏fugene转染试剂
调节免疫刺激特性鱼精蛋白稳定的RNA还可以调节免疫刺激特性。鱼精蛋白-RNA复合物可以刺激树突状细胞(DC),使其上调成熟标志物,并以剂量依赖的方式产生促炎性细胞因子1213。此外,两个DC亚群均以与IL-10有利的比率诱导T细胞增殖和IFNγ分泌1213。这表明鱼精蛋白-RNA复合物可用于离体刺激人mDC和pDC,用于免疫***环境1213。四、灵活的RNA递送系统平台鱼精蛋白作为RNA递送稳定剂,构建了一个灵活且多功能的平台。可以根据***目标进行调整,例如可以与靶向抗体融合实现精确递送,或者被消化成细胞穿透肽以提高转染效率,也可以与功能性聚合物非共价混合23。综上所述,鱼精蛋白作为RNA递送稳定剂,通过保护RNA免受降解、增强细胞穿透性、调节免疫刺激特性以及构建灵活的递送系统平台等多种机制,在RNA递送中发挥着重要作用。中国台湾minic转染试剂提高 RNA 转染试剂的转染效率同时降低细胞死亡。
对细胞周期的影响:在微小RNA-1180转染肾*细胞的实验中,FCM结果显示,转染miR-1180后,位于G0/G1期的细胞比例明显增大,而位于S期和G2/M期的细胞比例明显下降,表明细胞周期被阻滞在G0/G1期1。对转染效率的影响:在脂质体介导RNA干扰质粒转染鸡成骨细胞条件的优化实验中,对转染前细胞融合度、质粒质量与脂质体体积比及转染时间进行优化,在荧光倒置显微镜下观察并计算转染效率。结果表明,在转染前细胞融合达到90%以上,质粒DNA与脂质体比例为1:2.5时转染效率比较高,并且在转染后48h转染效果比较好3。在筛选更优的脂质体转染试剂的实验中,分别用RNAiMax及MessageMax将modGFP转染入MEF细胞,流式分析发现MessageMax的转染效率为(83.33%±3.23%),略高于RNAiMax的(78.77%±6.12%),两者没有统计学差异,但是流式分析和荧光显微镜观察均表明MessageMax转染后1周内的蛋白翻译表达效率更高,是更高效的modRNA转染试剂8。
RNA 转染试剂的效果受到多种因素的影响,包括细胞类型、转染试剂种类、转染条件等。在实际应用中,需要根据具体的实验需求选择合适的转染试剂和优化转染条件,以提高转染效率并减少对细胞的毒性作用。
阳离子壳交联的类Knedel纳米粒子作为转染试剂结合机制:阳离子壳交联的类Knedel纳米颗粒(cSCKs)含有不同百分比伯胺和叔胺,通过与siRNA结合来发挥作用18。含100%伯胺的cSCK在HeLa细胞中的沉默效率比较高,能够抑制人血清中siRNA降解以及转染HeLa和小鼠巨噬细胞系。与融合的GALA肽复合可以增强iNOS在较低siRNA浓度下的siRNA沉默,这被证明可以增强摄取后的内体逃逸,进一步说明其结合机制可能涉及与siRNA的紧密结合以及促进细胞内转运。作用特点:cSCK-pa100在HeLa细胞、293T细胞和人支气管上皮(HEK)细胞中显示出比Lipofectamine2000更高的沉默效率,但在人支气管上皮(BEAS-2B)细胞和人乳腺上皮(MCF10a)细胞中可比。在小鼠巨噬细胞系中,cSCK-pa100表现出更大的iNOS沉默,并提供了更好的保护免于血清降解,证明了其作为siRNA转染剂的潜在用途。综上所述,不同类型的阳离子RNA转染试剂在结合RNA分子的机制上存在差异,主要涉及静电相互作用、纳米复合物形成以及与其他分子的协同作用等方面。这些差异导致了它们在转染效率、细胞毒性、对不同细胞类型的适用性等方面的不同特点。基于病毒的转染,或者更具体地称为转导,涉及使用病毒载体将特定的核酸序列带入宿主细胞。
在鲤上皮瘤细胞中的应用在鲤上皮瘤细胞进行基因功能研究时,转染试剂和DNA的剂量以及取样时间缺乏统一的数据支持。选取两种常用转染试剂Lipofectamine®2000和FuGENE®HD进行多配组转染试验,在28℃,以35mm培养皿铺板,16μLLipofectamine®2000和4μgDNA在转染后48h达到比较高转染效率(±)%;12μLFuGENE®HD和4μgDNA在转染72h后转染效率达到(±)%。通过构建鲤高不饱和脂肪酸合成相关转录因子过氧化物酶体增殖物***受体蛋白α(PPARα)的EGFP标签载体进行验证,两种转染试剂分别获得了约4%和约8%的转染效率,并对下游脂肪酸去饱和酶2(fads2)基因的转录调控效应进行检测,结果为后续利用鲤上皮瘤细胞进行基因功能研究提供了数据支持5。在巨噬细胞中的应用商业转染试剂Lipofectamine已***用于核酸的细胞质递送和与细胞内先天免疫传感器进行细胞源啮合,以触发I型干扰素(IFN)生产。然而,单独对IIFN响应的脂质切积胺的影响尚未详细研究。研究表明,Lipofectamine诱导在原始,I型IFN诱导依赖于干扰素调节因子(IRF)3和IRF7,并且部分需要达洛/白细胞介素-1受体-含有结构域的适配器诱导的干扰素-β。相比之下,转染试剂XFECT未***IIFN信令6。 但似乎找到一种既能改善基因表达又不影响细胞、不对细胞造成损害的技术也至关重要。shRNA转染试剂指导
研究已经确定了阳离子脂质体(CLs)的某些特征,这些特征增强了它们在体内转运核酸的能力。江苏fugene转染试剂
选择合适的转染试剂GenMute试剂在人肝*细胞模型中的应用:在人肝*细胞HepG2和Huh7.5中,研究对比了脂质体类的Lipofectamine™RNAiMAX和HepG2特异性的聚合物类GenMute™两种转染试剂30。通过细胞成像分析发现,GenMute处理的细胞对荧光标记的阴性对照siRNA的摄取高于LipofectamineRNAiMAX转染的细胞。并且,MTT实验表明,GenMute转染的细胞比LipofectamineRNAiMAX处理的细胞具有更高的存活率。这提示在人肝*细胞模型中,GenMute试剂可能是更适合的转染试剂,在提高转染效率的同时降低了细胞死亡。siRNA共轭壳聚糖纳米颗粒在脊髓损伤模型中的应用:在创伤性脊髓损伤(SCI)模型中,通过制备带有抗体靶向部分的siRNA共轭壳聚糖复合物,以抑制诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,该复合物主要靶向M1巨噬细胞31。实验结果表明,Ab-siRNA共轭壳聚糖纳米颗粒在体外***降低了M1极化巨噬细胞中的iNOS表达,具有高转染效率和低细胞毒性。在体内应用该纳米颗粒后,SCI后的iNOS表达和细胞凋亡均减少。这说明在特定的病理模型中,针对性设计的纳米颗粒转染试剂可以在提高转染效率的同时降低细胞死亡。江苏fugene转染试剂