RNA电穿孔高效转染原代淋巴细胞:使用体外转录的mRNA通过电穿孔可以实现高基因转染效率和低转染相关毒性。例如,在用GFP或mCD62L转染的受激原代人和鼠T淋巴细胞中观察到90%以上的转基因表达和80%以上的活细胞。GFPRNA对未刺激的人PBMC或鼠脾细胞进行电穿孔,分别产生95%和56%的GFP⁺细胞。此外,基因表达迅速且持久,对经过RNA电穿孔的T淋巴细胞未观察到不良影响7。五、优化共转染方法整合共转染和平行共转染:研究不同的共转染和连续转染方法,特别是体外转录信使RNA(IVTmRNA)。对于在纳米载体形成之前预混合的IVTmRNAs(整合共转染)和同时用单独形成的纳米载体转染细胞(平行共转染),分析决定共转染效率的定量参数。同时递送siRNA和mRNA也表明整合方法的比较高共转染效率,但由于两个**运营实体的峰值输出在动力学上不同,连续交付的效率比较高。研究已经确定了阳离子脂质体(CLs)的某些特征,这些特征增强了它们在体内转运核酸的能力。辽宁厦门转染试剂
质子泵抑制剂可以通过基于从一个供体蛋白到受体蛋白的能量转移的物理测量来评估,也可以通过化学测量来评估,在化学测量中,表达的蛋白质与另一种蛋白质之间的相互作用活性可以在刺激时通过适当的报告系统来检测。后一种基于荧光素酶的方法被称为生物发光共振能量转移(BRET),它是荧光共振能量转移研究质子泵抑制剂的替代方法。多个质粒的共转染也可以应用于转染,其中包括将编码Cas9蛋白和引导RNA的质粒递送到宿主细胞,使用CRISPR/Cas9基因组工程系统进行基因组编辑。除了使用多个质粒外,双链载体是另一种将不同基因传递到宿主细胞的方法。双链载体是一种能够表达两种不同基因的载体,通过一个内部核糖体进入位点连接,只有一个启动子。山东干细胞转染试剂转染时推荐使用血清减少或无血清培养基包括阳离子转染试剂,如Lipofectamine、HiperFect 和EndofectinMax。
RNA和信使RNA与DNA转染类似,RNA可以通过基于RNA的病毒或非病毒载体导入真核细胞。与涉及DNA的转染相比,RNA转染可能产生更高的转染效率,因为后者不需要穿越核膜。在不需要基因组整合、转录和转录后处理的情况下,RNA转染也可能加速所需蛋白质的产生。使用基于信使RNA(mRNA)的载体也可以防止因整合到宿主基因组而引起的并发症,从而允许表达特定的,所需的蛋白质。然而,RNA转染后,蛋白质表达是短暂的,与DNA相比,RNA的稳定性相对较差,因此在细胞内运输时更容易降解。小RNA是长度为18-200个碱基对(bp)的RNA分子,具有调控转录后基因调控和RNA修饰的能力。小RNA包括microRNAs(miRNAs)、小干扰RNA(siRNA)、短发夹RNA(shRNA)等。microRNAs和piRNAs都是内源性单链小RNA。miRNAs(18-25bp)通过抑制目标mRNA或干扰其翻译起始,参与下游mRNA的转录后调控。与miRNAs和piRNAs类似,siRNA也在调控转录后基因表达中发挥作用。siRNA的长度通常为20-24bp,可表达为内源性或外源性双链小RNA。shRNA是一种具有发夹环的内源性双链小RNA。shRNA可以结合mRNA上的互补序列来降解它。
原代细胞和干细胞的转染效率通常较低。原代细胞刚刚从组织中分离出来,还保留着体内复杂的生理特性,其细胞膜上的受体和内吞机制等可能不适应脂质体转染。例如,原代间充质干细胞的转染效率可能低于10%。干细胞由于其特殊的自我更新和分化潜能,其细胞内部的信号通路和膜运输机制对脂质体转染比较敏感,转染效率也不高。而且在转染过程中,还需要考虑不影响干细胞的干性,这也增加了转染的难度。
原代细胞和干细胞对脂质体的毒性反应比较敏感。脂质体可能会干扰它们的正常生理功能,如影响干细胞的自我更新和分化能力。对于原代细胞,可能会改变其原有的表型或者***细胞的应激反应,导致细胞提前衰老或者死亡。 脂质颗粒的加入导致内体DNA释放增加。
鱼精蛋白作为RNA递送稳定剂具有重要作用,其具体作用机制主要包括以下几个方面:一、保护RNA免受降解鱼精蛋白是一种天然阳离子肽混合物,由于其带正电荷的特性,可以与带负电荷的RNA通过相反电荷驱动耦合23。在生物系统中,RNA很容易被RNase降解,而鱼精蛋白可以与RNA复合,形成稳定的复合物,从而保护RNA免受降解1213。例如,通过将单链RNA(ssRNA)与带正电荷的蛋白鱼精蛋白复合,可以稳定阴离子RNA1213。二、增强细胞穿透性鱼精蛋白不仅可以保护RNA,还能增强RNA的穿透细胞的能力。鱼精蛋白-RNA复合物的形成具有双重功能,一方面保护RNA不被降解,另一方面增强其穿透进入细胞的能力23。这种增强的细胞穿透性可能是由于鱼精蛋白的阳离子性质,使其能够与细胞膜相互作用,促进RNA的进入细胞2。利用外泌体途径的一种潜在方法是将脂质体核酸重新包装到外泌体中。难转细胞转染试剂指导
脂质复合物(CLNACs)通过网格蛋白参与的内吞作用进入细胞。辽宁厦门转染试剂
动物视网膜成像技术为基础研究提供了有力工具。从小鼠视网膜多种成像方式探讨眼科光学成像技术进展:张鹏飞、张廷玮、宋维业阐述了近年来在小鼠和人眼视网膜高精度光学成像领域出现的技术突破6。几种在人眼视网膜成像中广泛应用的光学成像技术在动物视网膜中得到了成功应用,实现了对动物视网膜的高精度细胞级别成像,为科研工作者提供了有力工具。同时,动物视网膜的研究工作也开发了一些新型成像技术或增强了对人眼视网膜功能机理的理解。综上所述,动物成像技术在磁共振成像、热成像、X射线发光成像、近红外高光谱成像、非人灵长类动物超高场磁共振脑成像、新型动物摇篮的小动物多重成像、红外成像以及动物视网膜成像等方面都取得了***的发展,为动物研究和相关领域的发展提供了重要的技术支持。辽宁厦门转染试剂