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环状RNA是什么？ 环状RNA（circRNAs）是一类不具有5’末端帽子和3’末端poly(A)尾巴、并以共价键形成环形结构的非编码RNA分子。目前发现的circRNAs主要来源于基因外显子exon，但还有其他类型，比如来源于内含子intron，基因间intergenic，反义链antisense，重叠区sense overlapping。首先需要确定好研究物种，疾病模型，样品类型等基本信息。接下来，通过高通量手段即RNA-seq（云序提供全转录组-seq或circRNA-seq）或文献报道，筛选差异表达的circRNA。如果想短平快的发表3-5分的文章，那么表达谱分析显得再合适不过了。如果有大量的临床样本，那么做分子标志物也是很easy的，思路和表达谱分析相似如下图展示，不过多了临床样本的统计和验证。（比如KM曲线，ROC曲线，PAM分析等等）云序生物提供一站式环状RNA实时定量PCR技术服务。青海环状平台

从环状RNA结合功能蛋白角度，成功的向我们展示了核内circRNA具有重要生理功能，以及该类型circRNA的研究方法。首先通过高通量测序筛选与造血干细胞干性维持相关的circRNA分子，围绕该分子设计一系列体内、体外干扰实验，确定其可引起干细胞干性维持相关细胞表型改变。后续，与circRNA 海绵机制研究类似，RNA Pull Down实验及RIP实验成为机制研究成功与否的关键钥匙。作者基于RNA Pull-down技术筛选到可能与Cia-cGAS相互作用的蛋白质，并进一步通过RIP实验反向验证。贵州环状lncRNA测序m1A RNA甲基化是一类新发现的RNA甲基化，即RNA分子腺嘌呤第1位氮原子上的甲基化修饰。

研究二：环状RNA分子细胞表型 作者发现Cia-cGAS是由D430042O09Rik的4、5、6号外显子连接成环。且位于外显子上下游的内含子区域具有成环所需高度同源序列。作者通过Cas9技术手段，敲除一端同源序列后，成功获得Cia-cGAS 敲除小鼠模型。敲除小鼠中LSK祖细胞明显增多，LT-HSC明显减少，且基因敲除小鼠出生6个月后会死于贫血。对基因敲除小鼠中LT-HSC进行BrdU染色，结果说明敲除小鼠中LT-HSC细胞处于增殖分裂活跃期。同时脉冲标记H2B-GFP小鼠模型证实Cia-cGAS敲除后，静息状态的LT-HSC细胞比例明显降低。

作为一种广fan存在于各类真核生物中的新型非编码RNA，环状RNA逐渐成为了当下热门的明星分子。由于环状RNA的研究刚刚起步，已经进行过环状RNA研究的物种数量还非常有限。因此，对新物种中环状RNA表达谱进行系统性研究就成为了发表SCI文章的一条捷径。 云序生物客户发表的这项成果是全世界di一篇对非洲爪蟾环状RNA进行系统性研究的文章，也为广大研究人员提供了一个非常好的模板，即：如何通过环状RNA高通量测序和生物信息学分析，在不进行功能和分子机制研究的情况下，短平快的发表一篇影响因子不错的文章，非常具有借鉴意义。RIP(RNA Immunoprecipitation)是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术。

技术简介 环状RNA(circular RNA，circRNA)是新发现的一类新型非编码RNA分子，其在真核细胞中的大量存在颠覆了传统的线性RNA观点，成为近两年来RNA领域中迅速升起的一颗新星。环状RNA的表达具有组织和疾病特异性，与组织发育、疾病的发生 和发展密切相关。此外，环状RNA不易降解，能在血浆、唾液等体液中稳定存在，可以作为新型疾病分子标志物。当前，科研人员对这一功能性分子仍知之甚少，可见对其展开深入的研究势在必行，一场科研的竞赛已悄然开始! 云序生物提供的环状RNA测序服务，采用Cloudseq CircRNA Enrichment Kit，去除样本中的线性mRNA和rRNA，保留纯化后的环状RNA，因此测序获得的环状RNA有效数据量是其他测序服务供应商远远无法企及的，帮助客户以较低的成本检测到更多的环状RNA。此外，Cloudseq CircRNA Enrichment Kit覆盖几乎全部已知物种，对环状RNA的研究将不再局限于人、小鼠、大鼠等常见物种。circRNA的类型比想象的要复杂，可以来自基因组上多种基因结构。贵州m5c环状RNA实时定量PCR

circRNA亦可直接通过局部碱基配对靶向mRNA。青海环状平台

3.2 RNA pull-down+MS/WB/qPCR/RNA-Seq 设计目标RNA生物探针把相应的结合蛋白质与RNA复合物沉淀下来，蛋白质谱检测或WB检测与RNA结合的蛋白。设计目标RNA生物探针把相应的结合蛋白质与RNA复合物沉淀下来，qPCR检测或RNA-seq检测与RNA结合的RNA。 3.3 双荧光素酶报告实验 双荧光素酶报告实验检测两个基因之间的互作。 3.4 病毒液以及siRNA设计 提供circRNA过表达以及干扰慢病毒，腺病毒以及设计siRNA。 四、CircRNA修饰研究 4.1m6A/m5C/ac4C/m7G/m1A等修饰 针对环状RNA各类修饰进行高通量筛选。 4.2 MeRIP-circRNA-PCR验证 对高通量测序的结果，通过qPCR进行进一步验证。青海环状平台

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