目前几种常用免疫组化方法简单介绍
1)免疫荧光方法是**早建立的免疫组织化学技术。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便,所以在临床病理诊断、检验中应用较广。它利用抗原抗体特异性结合的原理,先将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光,从而可确定组织中某种抗原的定位,进而还可进行定量分析。
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2)免疫酶标方法免疫酶标方法是继免疫荧光后,于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前**常用的技术。本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是:定位准确,对比度好,染色标本可长期保存,适合于光、电镜研究等。免疫酶标方法的发展非常迅速,已经衍生出了多种标记方法,且随着方法的不断改进和创新,其特异性和灵敏度都在不断提高,使用也越来越方便。目前在病理诊断中广为使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法检测系统等。
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临床应用中,药物靶点免疫组化,英瀚斯生物专业做实验外包服务,一站式医学科研平台。免疫组化及分子病理学方法在疾病诊断中只只起辅助医疗的作用,而药物病理学是用病理学的方法确定药物医疗的靶点、评价药物医疗的疗效、预测药物医疗的反应,因此药物靶点免疫组化属“单独的诊断”。因此对于对照的设置、质量的控制均需要更高的要求,如对试剂的要求,不同于一般的诊断试剂,应按对药物管理的要求操作。HER2蛋白着色3+者可作为临床医生建议患者接受曲妥珠单抗等药物医疗的依据。山西组织免疫组化要多久免疫组化结果分析是什么?
免疫组化实验所用的组织和细胞标本是什么样的?
实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理大片和组织芯片)和冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本**常用、**基本的方法,对于组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能长期存档,供回顾性研究;石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响,但可进行抗原修复,是免疫组化中优先的组织标本制作方法。
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免疫组化结果要如何分析?
(1)阳性着色细胞计数法。在40*光镜下,随机选择不重叠的10个视野,机器或人工计数阳性着色细胞,每组3~6张不同动物组织切片,然后进行组间比较即可。
(2)灰密度分析法。可以通过在不同组别和不同动物组织切片上选择相同区域、相同条件下用image j进行灰密度分析,然后进行统计分析即可。
(3)评分法。用光学显微镜下对组织切片分别按染色程度(0~3分为阴性着色、淡黄色、浅褐色、深褐色)、阳性范围进行评分(1~4分为0~25%、26~50%、51~75%、76~100%),**终可以分数相加,再进行比较。对于以上这几种方法,各有利弊,请细心选择。要想得到正确结果的前提是你要做出着色均匀、背景很浅的高质量切片。
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医疗和预后有关的免疫组化。与医疗及预后有关的标记物主要分以下为三类:(1)cancer基因标记物:如cancer基因C-erbB2、c-myc、P53蛋白等,卵巢上皮性cancer中P53的过表达与cancer的扩散、分化、术后残存cancer灶呈正相关;乳腺cancer中表达C-erbB2的浸润性cancer患者预后差;肺cancer中突变型P53基因蛋白表达增高,PTEN基因表达减弱,提示cancer预后不良。(2)细胞增殖性标记物:cancer细胞增生是否活跃直接影响着临床的医疗与预后,如表皮生长因子受体(EGFR)、Ki-67、PCNA、cycling等可对cancer细胞的增生做出评价,表达指数越高,表明其增殖指数越活跃,恶性度增高,预后不良,其中以恶性淋巴瘤乳腺cancer较为明显;在对乳腺cancer的研究中发现Ki-67、EGFR阳性者,淋巴结转移率高,并与ji素受体的表达呈负相关。(3)类固醇ji素受体:如雌ji素受体(ER)、孕ji素受体(PR)等,应用更为范围广的的是子宫内膜cancer及乳腺cancer,如对乳腺cancer中ER、PR的检测,有助于决定临床医疗中是否需要加入内分泌ji素阻断医疗,并能判断预后,ER及PR阳性表达、原cancer基因(C-erbB-2)阴性表达病例对三苯氧胺等ji素医疗反应良好,而ERPR、C-erbB-2三种抗体均阴性(TNBC)患者采用三苯氧胺可能意义不大。免疫组化方法步骤是什么?吉林组织免疫组化哪家好
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免疫组化实验流程介绍:
英瀚斯生物为您整理总结免疫组化详细步骤:
1、SP三步法
1)石蜡切片,常规脱蜡至水。
2)0.3%或3%H2O2去离子水(无色液体)孵育10-30分钟,以灭活内源性过氧化物酶活性。
3)蒸馏水冲洗,PBS浸泡5分钟
4)候选步骤:采用抗原修复:微波(建议30分钟内4次中火)、高压、酶修复方法。自然冷却,再用3分钟×3次.
5)血清封闭:室温15-30分钟,尽可能与二抗来源一致。倾去,勿洗。
6)滴加适当比例稀释的一抗,37℃孵育2~3小时或4℃过夜(比较好复温)。PBS冲洗,3分钟×5次。
7)滴加生物素标记的二抗,室温或37℃孵育30分钟-1h。
8)PBS冲洗,3分钟×5次。
9)滴加SP(链霉亲和素-过氧化物酶),室温或37℃孵育30分钟-1h。
10)PBS冲洗,3分钟×5次。
11)显色剂显色(DAB等)。
12)自来水充分冲洗。
13)可进行复染,脱水,透明。
14)选择适当的封片剂封片。 陕西切片免疫组化是什么
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