鸡胚成纤维(CEF)细胞、293细胞、PK细胞和MDCK细胞:在RNA干涉中,转染试剂的用量与siRNAs的量成正相关关系,但转染试剂对细胞有一定毒性作用。相同用量的RNAiFectTM和SuperFect两种转染试剂对293细胞、PK细胞和MDCK细胞的生长影响远远小于对CEF细胞的影响。两种转染试剂用于外源小分子转染时,建议在293细胞、PK细胞和MDCK细胞上的用量不超过3ul。两种转染试剂对CEF细胞的毒性较大,不适合用于转染111316。MEF细胞、3T3细胞、Hela细胞及MCF-7细胞:分别用RNAiMax及MessageMax将modGFP转染入MEF细胞,流式分析发现MessageMax的转染效率略高于RNAiMax,但两者没有统计学差异。但是流式分析和荧光显微镜观察均表明MessageMax转染后1周内的蛋白翻译表达效率更高,是更高效的modRNA转染试剂。MessageMax能将modGFP高效转染入3T3细胞、Hela细胞及MCF-7细胞中,并实现modGFP和modmCherry在MEF细胞中的共转及核内因子nGFP和mTBX5在MEF细胞核中的定位。纳米颗粒,由于其在DNA转运到细胞中的保护能力,在不久的将来可以用作转基因的非病毒载体。中国澳门体内转染试剂
电转染方式:机制概述:电转染是利用电场作用使细胞膜产生可逆性的通透性增加,从而使RNA分子能够进入细胞。在适当的电场条件下,细胞膜上会形成微孔,RNA分子通过这些微孔进入细胞。当电场消失后,细胞膜会逐渐恢复正常状态。在不同细胞类型中的表现:在人脂肪干细胞(hADSC)中,Optimization6电转方式转染hADSC的效率高于其他电转染方式(Optimization4)和脂质体转染试剂RNAiMAX。荧光显微镜观察及流式分析均表明电转染方式的蛋白表达优于RNAiMAX脂质体转染。这说明电转染方式在hADSC中能够更有效地将modRNA转染入细胞,并实现特定蛋白的表达10。鱼精蛋白相关转染试剂:机制概述:鱼精蛋白是一种天然阳离子肽混合物,可用于稳定和递送核酸,包括信使RNA(mRNA)等。当与RNA混合时,鱼精蛋白会自发地产生粒径在20-1000nm范围内的颗粒,这些颗粒可用于疫苗接种和免疫刺激。不同等级的鱼精蛋白在与mRNA形成复合物时表现出不同的转染能力,其转染机制可能与鱼精蛋白的来源等因素有关。在不同细胞类型中的表现:鱼精蛋白相关转染试剂在多种细胞类型中的具体表现目前文献中未详细提及,但研究表明不同来源的鱼精蛋白制剂在其组成和转染mRNA的能力上存在很大差异。广东阳离子转染试剂是由非离子核酸与阳离子脂质体(CLs)表面结合,形成多层脂质-核酸复合物而形成的。
优化转染条件MOI值对Lentivirus载体转染许旺细胞的影响:以Lentivirus三质粒系统构建病毒载体,在体外对原代大鼠许旺细胞进行转染,研究不同MOI值(***复数)对转染效率的影响32。结果显示,在病毒转染3天后,各不同MOI值的培养孔中开始出现少量荧光反应,第5天时荧光数量明显增多,第7天达到高峰,第9天与第7天变化不明显。从细胞转染效率来看,不同的MOI值效果不同,MOI值为5和10时转染效率较高。这表明在使用Lentivirus载体转染许旺细胞时,优化MOI值可以提高转染效率。同时,未提及该转染过程对细胞死亡的影响,但可以通过进一步的实验,如细胞活性检测等,来确定在提高转染效率的同时对细胞死亡的影响。
纳米颗粒递送药物并发挥功能的能力在很大程度上取决于它们被细胞摄取的机制。以蒲公英汤剂体为例,研究发现亲溶酶体物质能***抑制蒲公英汤剂体进入细胞;巨胞饮抑制剂细胞松弛素D和阿米洛利能***降低蒲公英汤剂体的胞内摄入,且呈现剂量依赖性,敲减Rac1和PAK1也有效地抑制其进入细胞。这些结果提示蒲公英汤剂体通过内吞进入A549细胞且主要由巨胞饮介导26。同理,RNA转染试剂在某些情况下也可能利用巨胞饮途径进入细胞。电穿孔转染中的内吞途径电穿孔转染是一种用于基因递送的技术,在研究其机制时发现,用冰冷介质处理或在电穿孔转染前使用内吞抑制剂处理三种不同的人类细胞系(HEK293、HCT116和HT29)。结果表明,用冰冷介质、氯丙嗪或染料木黄酮处理会***降低所有三种细胞系的电穿孔转染效率,但阿米洛利处理对电穿孔转染效率影响不***。对于用小干扰RNA(siRNA)处理的细胞,只有敲低网格蛋白重链(CLTC)会导致所有三种细胞系的电穿孔转染效率降低。这些数据表明,网格蛋白介导的内吞作用在电穿孔转染中起着重要作用27。用二乙基氨基乙基修饰,右旋糖酐链的酰胺化很容易被质子化,这使得它可以自组装成带负电荷核酸的纳米颗粒。
在鲤上皮瘤细胞中的应用在鲤上皮瘤细胞进行基因功能研究时,转染试剂和DNA的剂量以及取样时间缺乏统一的数据支持。选取两种常用转染试剂Lipofectamine®2000和FuGENE®HD进行多配组转染试验,在28℃,以35mm培养皿铺板,16μLLipofectamine®2000和4μgDNA在转染后48h达到比较高转染效率(±)%;12μLFuGENE®HD和4μgDNA在转染72h后转染效率达到(±)%。通过构建鲤高不饱和脂肪酸合成相关转录因子过氧化物酶体增殖物***受体蛋白α(PPARα)的EGFP标签载体进行验证,两种转染试剂分别获得了约4%和约8%的转染效率,并对下游脂肪酸去饱和酶2(fads2)基因的转录调控效应进行检测,结果为后续利用鲤上皮瘤细胞进行基因功能研究提供了数据支持5。在巨噬细胞中的应用商业转染试剂Lipofectamine已***用于核酸的细胞质递送和与细胞内先天免疫传感器进行细胞源啮合,以触发I型干扰素(IFN)生产。然而,单独对IIFN响应的脂质切积胺的影响尚未详细研究。研究表明,Lipofectamine诱导在原始,I型IFN诱导依赖于干扰素调节因子(IRF)3和IRF7,并且部分需要达洛/白细胞介素-1受体-含有结构域的适配器诱导的干扰素-β。相比之下,转染试剂XFECT未***IIFN信令6。 转染试剂的冻融被认为是另一个可能影响转染效率的潜在因素。mRNA转染试剂细胞实验
提高 RNA 转染效率是 RNA 研究领域中的重要课题。中国澳门体内转染试剂
对细胞周期的影响:在微小RNA-1180转染肾*细胞的实验中,FCM结果显示,转染miR-1180后,位于G0/G1期的细胞比例明显增大,而位于S期和G2/M期的细胞比例明显下降,表明细胞周期被阻滞在G0/G1期1。对转染效率的影响:在脂质体介导RNA干扰质粒转染鸡成骨细胞条件的优化实验中,对转染前细胞融合度、质粒质量与脂质体体积比及转染时间进行优化,在荧光倒置显微镜下观察并计算转染效率。结果表明,在转染前细胞融合达到90%以上,质粒DNA与脂质体比例为1:2.5时转染效率比较高,并且在转染后48h转染效果比较好3。在筛选更优的脂质体转染试剂的实验中,分别用RNAiMax及MessageMax将modGFP转染入MEF细胞,流式分析发现MessageMax的转染效率为(83.33%±3.23%),略高于RNAiMax的(78.77%±6.12%),两者没有统计学差异,但是流式分析和荧光显微镜观察均表明MessageMax转染后1周内的蛋白翻译表达效率更高,是更高效的modRNA转染试剂8。
RNA 转染试剂的效果受到多种因素的影响,包括细胞类型、转染试剂种类、转染条件等。在实际应用中,需要根据具体的实验需求选择合适的转染试剂和优化转染条件,以提高转染效率并减少对细胞的毒性作用。 中国澳门体内转染试剂