脂质体组成：脂质体的组成对转染效率有重要影响。不同的脂质体可能具有不同的电荷性质、大小和稳定性，这些因素都会影响脂质体与细胞的相互作用。阳离子脂质体通常具有较高的转染效率，因为它们可以与带负电荷的DNA结合，并通过静电作用与细胞表面结合。例如，Lipofectamine2000和Lipofectamine3000都是常用的阳离子脂质体，它们在不同类型的细胞中都表现出较高的转染效率11316。脂质体的组成还可能影响其在细胞内的释放和稳定性。一些脂质体可能更容易被细胞内的酶降解，从而降低转染效率。阳离子脂质体合成中常用的分子是中性脂质二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。lipo3000转染试剂难转染
鱼精蛋白作为RNA递送稳定剂具有重要作用，其具体作用机制主要包括以下几个方面：一、保护RNA免受降解鱼精蛋白是一种天然阳离子肽混合物，由于其带正电荷的特性，可以与带负电荷的RNA通过相反电荷驱动耦合23。在生物系统中，RNA很容易被RNase降解，而鱼精蛋白可以与RNA复合，形成稳定的复合物，从而保护RNA免受降解1213。例如，通过将单链RNA（ssRNA）与带正电荷的蛋白鱼精蛋白复合，可以稳定阴离子RNA1213。二、增强细胞穿透性鱼精蛋白不仅可以保护RNA，还能增强RNA的穿透细胞的能力。鱼精蛋白-RNA复合物的形成具有双重功能，一方面保护RNA不被降解，另一方面增强其穿透进入细胞的能力23。这种增强的细胞穿透性可能是由于鱼精蛋白的阳离子性质，使其能够与细胞膜相互作用，促进RNA的进入细胞2。lipo3000转染试剂难转染常用的物理/机械转染方法包括电穿孔、声孔、基因显微注射和激光照射。
转染时间对奶牛子宫内膜原代上皮细胞转染的影响：在奶牛子宫内膜原代上皮细胞中，应用带有FAM标记的miRNA-185mimics为报告基因，检测两种不同转染试剂（LipofectamineRNAiMAX与Lipofectamine2000）在细胞接种不同时间后的转染效率33。结果显示，无论使用哪种转染试剂，12h的转染效率均极***高于18、24h，LipofectamineRNAiMAX各时间点的转染效率均极***高于Lipofectamine2000。并且，使用LipofectamineRNAiMAX作为转染试剂时，12h的荧光强度也比较高。这说明在奶牛子宫内膜原代上皮细胞中，选择合适的转染试剂和转染时间可以提高转染效率。同时，该研究未明确转染对细胞死亡的影响，但可以进一步研究不同转染条件下细胞的存活率，以确定在提高转染效率的同时降低细胞死亡的比较好条件。
在核酸递送中的应用核酸***可以通过基因增强、基因抑制和基因组编辑实现持久甚至***的效果。然而，裸核酸分子难以进入细胞，阳离子聚合物作为非病毒核酸递送系统，其分子上带有正电荷基团，可浓缩核酸分子形成纳米颗粒，帮助核酸跨越屏障在细胞中表达蛋白质或抑制目标基因表达。阳离子聚合物易于合成、修饰和结构控制，是一类有前途的核酸递送系统7。在颅内递送合成mRNA中的应用在本研究中，使用常用的转染试剂建立了颅内递送合成mRNA的小鼠模型。将合成的荧光素酶mRNAs用两种不同的转染试剂包裹后定点微注射到大脑中，通过小动物成像系统监测递送的mRNA的表达状态，并通过行为和血液生化测量评估可能的试剂诱导的生物毒性。该模型表明，合成mRNA可以用常用的转染试剂成功递送到大脑中，且没有可测量的毒性，外源性mRNA的表达在颅内注射后在合理的时间内持续存在。合成修饰的TRAILmRNA也被用作***应用的例子9。其结构的一个共同特征是分子中存在许多带正电的基团，这些基团被质子化成带正电的聚合物。
电转染方式：机制概述：电转染是利用电场作用使细胞膜产生可逆性的通透性增加，从而使RNA分子能够进入细胞。在适当的电场条件下，细胞膜上会形成微孔，RNA分子通过这些微孔进入细胞。当电场消失后，细胞膜会逐渐恢复正常状态。在不同细胞类型中的表现：在人脂肪干细胞（hADSC）中，Optimization6电转方式转染hADSC的效率高于其他电转染方式（Optimization4）和脂质体转染试剂RNAiMAX。荧光显微镜观察及流式分析均表明电转染方式的蛋白表达优于RNAiMAX脂质体转染。这说明电转染方式在hADSC中能够更有效地将modRNA转染入细胞，并实现特定蛋白的表达10。鱼精蛋白相关转染试剂：机制概述：鱼精蛋白是一种天然阳离子肽混合物，可用于稳定和递送核酸，包括信使RNA（mRNA）等。当与RNA混合时，鱼精蛋白会自发地产生粒径在20-1000nm范围内的颗粒，这些颗粒可用于疫苗接种和免疫刺激。不同等级的鱼精蛋白在与mRNA形成复合物时表现出不同的转染能力，其转染机制可能与鱼精蛋白的来源等因素有关。在不同细胞类型中的表现：鱼精蛋白相关转染试剂在多种细胞类型中的具体表现目前文献中未详细提及，但研究表明不同来源的鱼精蛋白制剂在其组成和转染mRNA的能力上存在很大差异。流式细胞术可以更精确地定量表达特定荧光基因的细胞，以评估转染效率。上海转染试剂
PLL(聚L -赖氨酸)是生理条件下带正电的多氨基酸,当链长超过20个残基时，它与质粒DNA结合并凝聚成致密颗粒。lipo3000转染试剂难转染
在腺相关病毒载体（AAV）生产中的应用纳米凝胶由微流体产生，作为标准转染试剂如聚乙烯亚胺-MAX（PEI-MAX）的新型替代品，用于生产具有可比产量的AAV载体。在pDNA重量比为1:1:2和1:1:3（分别为pAAV顺式质粒、pDG9衣壳反式质粒和pHGTI辅助质粒）时形成纳米凝胶，在小规模下，载体产量与PEI-MAX相比没有***差异。氮/磷酸盐比为5和10的1:1:2重量比的纳米凝胶分别产生约8.8×10⁸vg/mL和约8.1×10⁸vg/mL的产量，而PEI-MAX约为1.1×10⁹vg/mL。在大规模生产中，优化的纳米凝胶以约7.4×10¹¹vg/mL的滴度产生AAV，与PEI-MAX的约1.2×10¹²vg/mL相比没有统计学差异，表明可以用易于实施的微流体技术以相对较低的成本实现与传统试剂相当的滴度10。lipo3000转染试剂难转染
