在鲤上皮瘤细胞中的应用在鲤上皮瘤细胞进行基因功能研究时,转染试剂和DNA的剂量以及取样时间缺乏统一的数据支持。选取两种常用转染试剂Lipofectamine®2000和FuGENE®HD进行多配组转染试验,在28℃,以35mm培养皿铺板,16μLLipofectamine®2000和4μgDNA在转染后48h达到比较高转染效率(±)%;12μLFuGENE®HD和4μgDNA在转染72h后转染效率达到(±)%。通过构建鲤高不饱和脂肪酸合成相关转录因子过氧化物酶体增殖物***受体蛋白α(PPARα)的EGFP标签载体进行验证,两种转染试剂分别获得了约4%和约8%的转染效率,并对下游脂肪酸去饱和酶2(fads2)基因的转录调控效应进行检测,结果为后续利用鲤上皮瘤细胞进行基因功能研究提供了数据支持5。在巨噬细胞中的应用商业转染试剂Lipofectamine已***用于核酸的细胞质递送和与细胞内先天免疫传感器进行细胞源啮合,以触发I型干扰素(IFN)生产。然而,单独对IIFN响应的脂质切积胺的影响尚未详细研究。研究表明,Lipofectamine诱导在原始,I型IFN诱导依赖于干扰素调节因子(IRF)3和IRF7,并且部分需要达洛/白细胞介素-1受体-含有结构域的适配器诱导的干扰素-β。相比之下,转染试剂XFECT未***IIFN信令6。 纳米颗粒可以参与内体途径,并可以通过细胞质将DNA运输到细胞核。体外转染试剂动物实验
靶向特定基因座提高稳定转染效率:在布鲁氏锥虫中,利用RNAi的构建体和(GFP)标记的蛋白的表达,靶向(hyg)标记的核糖体RNA(RRNA)基因座,可以规避位置效应并提高靶向效率。该系统还利用新的诱导型RRNA启动子来驱动T7RNA聚合酶(T7RNAP)转录,然后从诱导型T7启动子驱动表达,可减轻当前表达系统的一些问题9。综上所述,提高RNA转染效率的策略包括选择合适的转染试剂、利用鱼精蛋白、优化电转方法、采用RNA电穿孔、优化共转染方法以及靶向特定基因座等。这些策略可以根据不同的实验需求和细胞类型进行选择和组合,以提高RNA转染效率,为RNA研究和应用提供有力支持。广西转染试剂效率高选择适合的 RNA 转染试剂是一个复杂的过程,需要综合考虑多个因素。
转染试剂用量:转染试剂的用量是影响转染效率的重要因素之一。过多或过少的转染试剂都可能导致转染效率降低。在阳离子脂质体Lipofectamine2000对PC12细胞的转染实验中,发现lipo2000用量为5μL,DNA2μg,转染时间为6h时,PC12细胞转染率高达40%,且未影响细胞的正常分泌3。在脂质体介导法转染肿瘤细胞效率的优化实验中,研究了细胞接种密度、DNA用量、脂质体与DNA的比例等因素对脂质体转染效率的影响。结果表明,2-5次细胞传代,2×105接种密度、4μgDNA用量、2.5:1的脂质体与DNA比例、30min脂质体-DNA复合物形成时间以及6h细胞与复合物孵育时间,转染效率比较高9
RNA转染试剂在不同细胞类型中的效果存在***差异。以下将详细阐述不同细胞类型对RNA转染试剂效果的具体影响。肾*细胞系786-O和ACHN:微小RNA-1180(miR-1180)转染对肾*细胞系786-O和ACHN生长有影响。实时定量(qRT)-PCR检测显示转染miR-1180后,786-O和ACHN细胞中p21mRNA水平分别上调。Westernblot检测表明p21蛋白表达趋势与qRT-PCR结果相符,同时细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、CDK6和CyclinD1蛋白的表达明显下调。流式细胞术(FCM)结果显示转染miR-1180后,位于G0/G1期的细胞比例明显增大,而位于S期和G2/M期的细胞比例明显下降,表明细胞周期被阻滞在G0/G1期。MTS结果显示转染miR-1180后,两种肾*细胞活力明显降低。集落形成实验显示miR-1180组的集落数数量明显较少,表明细胞增殖能力降低1。HeLa细胞:两种常见的RNA干扰(RNAi)转染试剂DharmaFECT1和INTERFERin,在使用非靶向siRNAs的模拟转染中,会引起HeLa细胞脂质组的改变。一些脂质对两种可能化学性质不同的转染试剂都有反应,而其他脂质种类只对其中一种试剂有反应。虽然这些脂质组改变的功能影响尚待研究,但实验表明在RNAi实验中使用适当的模拟转染对照非常重要,比较好辅以正交扰动。 PHP是由天然来源的羟基脯氨酸(如胶原蛋白、明胶和其他蛋白质)制成的,是一个用作基因载体的聚酯。
转染时间对奶牛子宫内膜原代上皮细胞转染的影响:在奶牛子宫内膜原代上皮细胞中,应用带有FAM标记的miRNA-185mimics为报告基因,检测两种不同转染试剂(LipofectamineRNAiMAX与Lipofectamine2000)在细胞接种不同时间后的转染效率33。结果显示,无论使用哪种转染试剂,12h的转染效率均极***高于18、24h,LipofectamineRNAiMAX各时间点的转染效率均极***高于Lipofectamine2000。并且,使用LipofectamineRNAiMAX作为转染试剂时,12h的荧光强度也比较高。这说明在奶牛子宫内膜原代上皮细胞中,选择合适的转染试剂和转染时间可以提高转染效率。同时,该研究未明确转染对细胞死亡的影响,但可以进一步研究不同转染条件下细胞的存活率,以确定在提高转染效率的同时降低细胞死亡的比较好条件。研究人员集中研究了将合成t细胞免疫原作为DNA疫苗使用的方法。广东神经细胞转染试剂
用二乙基氨基乙基修饰,右旋糖酐链的酰胺化很容易被质子化,这使得它可以自组装成带负电荷核酸的纳米颗粒。体外转染试剂动物实验
对细胞活力的影响:一些研究表明,在阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导下鸡TRPV6基因RNA干扰(RNAi)质粒转染入成骨细胞的实验中,当转染前细胞融合达到90%以上,质粒DNA与脂质体比例为1:2.5时转染效率比较高,并且在转染后48h转染效果比较好,对细胞的毒性作用较小3。在人肝瘤两种细胞模型中,通过比较LipofectamineRnaimax和Genmute转染剂发现,用基因***的细胞呈现荧光阴性对照siRNA的更高摄取,并且观察到与基因转染的细胞相对于脂质积rnaimax的细胞具有较高的活力6。有研究使用两种常见的RNA干扰(RNAi)转染试剂DharmaFECT1和INTERFERin,在模拟转染中使用非靶向siRNAs,结果表明这些试剂会引起HeLa细胞脂质组的变化,但功能影响仍有待研究,这也暗示在RNAi实验中使用适当的模拟转染对照非常重要。
体外转染试剂动物实验