对基因表达的影响:在微小RNA-1180转染对肾*细胞生长的影响的研究中,肾*细胞分为两组:dsControl组和miR-1180组。实时定量(qRT)-PCR检测p21mRNA的表达变化,结果显示转染miR-1180后,786-O和ACHN细胞中p21mRNA水平分别上调(P〈)和(P〈),p21蛋白表达趋势与qRT-PCR结果相符,CDK4、CDK6和CyclinD1蛋白的表达明显下调。同时,流式细胞术(FCM)检测细胞周期变化显示细胞周期被阻滞在G0/G1期,MTS结果显示细胞活力明显降低,集落形成实验显示细胞增殖能力降低。结论是miR-1180能******肾*细胞中p21蛋白的表达,并抑制肾*细胞786-O和ACHN的生长1。在微小RNA-330-5p过表达对宫颈*细胞C33A中肿瘤坏死因子受体相关因子4(TRAF4)基因表达的抑制作用和对C33A细胞增殖的影响的实验中,通过Lipofectamine2000转染试剂分别向宫颈*细胞系C33A瞬时转染miR-330-5p模拟物(设为实验组)或者转染miR-NC(设为对照组),结果显示与对照组相比,实验组C33A细胞中TRAF4mRNA下降(p<),TRAF4蛋白下降(p<)。集落形成实验显示,实验组C33A细胞的增殖能力明显下降(p<)。结论是miR-330-5p可通过降低宫颈*细胞C33A中TRAF4的表达抑制宫颈*细胞C33A的增殖。 deae-葡聚糖是一种化学修饰的葡聚糖类似物。siRNA转染试剂现货
阳离子壳交联的类Knedel纳米粒子作为转染试剂结合机制:阳离子壳交联的类Knedel纳米颗粒(cSCKs)含有不同百分比伯胺和叔胺,通过与siRNA结合来发挥作用18。含100%伯胺的cSCK在HeLa细胞中的沉默效率比较高,能够抑制人血清中siRNA降解以及转染HeLa和小鼠巨噬细胞系。与融合的GALA肽复合可以增强iNOS在较低siRNA浓度下的siRNA沉默,这被证明可以增强摄取后的内体逃逸,进一步说明其结合机制可能涉及与siRNA的紧密结合以及促进细胞内转运。作用特点:cSCK-pa100在HeLa细胞、293T细胞和人支气管上皮(HEK)细胞中显示出比Lipofectamine2000更高的沉默效率,但在人支气管上皮(BEAS-2B)细胞和人乳腺上皮(MCF10a)细胞中可比。在小鼠巨噬细胞系中,cSCK-pa100表现出更大的iNOS沉默,并提供了更好的保护免于血清降解,证明了其作为siRNA转染剂的潜在用途。综上所述,不同类型的阳离子RNA转染试剂在结合RNA分子的机制上存在差异,主要涉及静电相互作用、纳米复合物形成以及与其他分子的协同作用等方面。这些差异导致了它们在转染效率、细胞毒性、对不同细胞类型的适用性等方面的不同特点。辽宁DNA转染试剂化学转染可分为基于脂质体或非基于脂质体。
转染试剂用量:转染试剂的用量是影响转染效率的重要因素之一。过多或过少的转染试剂都可能导致转染效率降低。在阳离子脂质体Lipofectamine2000对PC12细胞的转染实验中,发现lipo2000用量为5μL,DNA2μg,转染时间为6h时,PC12细胞转染率高达40%,且未影响细胞的正常分泌3。在脂质体介导法转染肿瘤细胞效率的优化实验中,研究了细胞接种密度、DNA用量、脂质体与DNA的比例等因素对脂质体转染效率的影响。结果表明,2-5次细胞传代,2×105接种密度、4μgDNA用量、2.5:1的脂质体与DNA比例、30min脂质体-DNA复合物形成时间以及6h细胞与复合物孵育时间,转染效率比较高9
原代细胞和干细胞的转染效率通常较低。原代细胞刚刚从组织中分离出来,还保留着体内复杂的生理特性,其细胞膜上的受体和内吞机制等可能不适应脂质体转染。例如,原代间充质干细胞的转染效率可能低于10%。干细胞由于其特殊的自我更新和分化潜能,其细胞内部的信号通路和膜运输机制对脂质体转染比较敏感,转染效率也不高。而且在转染过程中,还需要考虑不影响干细胞的干性,这也增加了转染的难度。
原代细胞和干细胞对脂质体的毒性反应比较敏感。脂质体可能会干扰它们的正常生理功能,如影响干细胞的自我更新和分化能力。对于原代细胞,可能会改变其原有的表型或者***细胞的应激反应,导致细胞提前衰老或者死亡。 PLL(聚L -赖氨酸)是生理条件下带正电的多氨基酸,当链长超过20个残基时,它与质粒DNA结合并凝聚成致密颗粒。
考虑细胞毒性低细胞毒性的转染试剂对于保持细胞的活性和正常生理功能至关重要。评估细胞活力:可以通过检测细胞的存活率、增殖能力等指标来评估转染试剂的细胞毒性。在研究不同转染试剂对C2C12细胞的转染效率时,通过优化DNA:转染剂比例和细胞密度,使所有试剂在达到较高转染效率的同时,对细胞生长和活力的影响有限6。在比较不同转染试剂递送siRNA的摄取、敲低效率和毒性情况的研究中,新开发的CALNPRNAi转染试剂转染效率***高于传统转染试剂,同时毒性比较低7。选择温和的试剂:一些转染试剂可能对细胞的毒性较小,例如基于脂质的转染试剂通常比基于病毒的转染试剂更温和。在颅内递送合成mRNA的研究中,使用常用的转染试剂将合成mRNA递送至小鼠大脑,结果表明该模型中合成mRNA可以成功递送至大脑,且没有可测量的毒性8。评估转染效率至关重要,特别是在需要高转染效率以保证特定下游靶标转录后调控的功能研究中。福建肺转染试剂
人类原代干细胞是另一种公认的难以转染的细胞类型,转染这种细胞类型的挑战仍然是效率低和细胞活力低。siRNA转染试剂现货
其他转染试剂:机制概述:例如CALNPRNAi转染试剂,其转染机制可能与传统转染试剂不同。该试剂转染效率***高于传统转染试剂,同时毒性比较低。其具体转染机制可能涉及对RNA的摄取、细胞利用率及细胞毒性的综合作用。在不同细胞类型中的表现:目前文献中未明确提及CALNPRNAi转染试剂在特定细胞类型中的具体表现,但研究表明该试剂为难转染细胞的RNA干扰带来了新的选择7。综上所述,不同RNA转染试剂在不同细胞类型中的转染机制存在差异,这些差异主要表现在与RNA的结合方式、进入细胞的途径以及在细胞内的释放和作用方式等方面。了解这些差异对于选择合适的转染试剂进行特定细胞类型的RNA转染实验具有重要意义。siRNA转染试剂现货