从依那西普水解β1-3和β1-4半乳糖:Genovis的GalactEXO Immobilized 对 β1-3 和 β1-4 连接的半乳糖均具有酶活性,这些半乳糖存在于装饰有 N- 和 O-连接糖基化的生物制药中,例如 Fc-融合蛋白依那西普。将依那西普与GalactEXO固定化孵育60分钟,并在FabRICATOR消化后使用LC-MS在亚基水平上研究酶活性。TNFR和Fc/2片段分别分析。与GalactEXO Immobilized孵育导致N-连接和O-连接聚糖上的半乳糖残基水解,这在半乳糖基化物种中被视为信号丢失。对游离的N-聚糖分析证实了LC-MS数据。在天然条件下使用OmniGLYZOR Microspin色谱柱,可在3小时内有效去除C1 抑制剂O-聚糖。浙江固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶生物药物开发
Genovis的FucosEXO 是 α-岩藻糖苷酶的混合物,用于有效水解天然 N-和 O-糖基化蛋白或游离寡糖上的 α1-2、α1-3 和 α1-4-连接岩藻糖残基。它是 N-和 O-糖蛋白的聚糖结构分析以及寡糖的外切糖苷酶阵列的宝贵工具。1. 高效α-岩藻糖苷酶混合物 – 快速去除 α1-2、α1-3 和 α1-4-连接的岩藻糖;2. 可靠的酶解增加了对外切糖苷酶阵列的信心;3. 可固定在即用型离心柱中。用于糖蛋白去氟糖基化的冻干酶。Genovis的FucosEXO冻干剂以冻干粉的形式提供,装在2000单位的小瓶中,用于2mg糖蛋白的去碳基化。上海PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究对天然糖蛋白或游离的聚糖结构上存在的 N- 和 O-连接聚糖均具有活性。
GalNAcEXO固定化离心柱含有与琼脂糖珠共价偶联的GalNAcEXO酶,用于水解糖蛋白上的GalNAc残基,而不会用酶污染制剂。Microspin 色谱柱可用于水解 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白。1. 易于使用的离心柱;2. 提高酶与底物的比例,提高消化效率;3. 终样品中不含酶。用于水解离心柱中糖蛋白上的Genovis的GalNAc残基的固定化酶。GalNAcEXO 酶是一种n 外α-N-乙酰半乳糖氨酸酶,可快速有效地水解来自天然 O-糖蛋白的 z es GalNAc 残基。 该酶来源于Akkermansia muciniphila,在大肠杆菌中表达,带有His标签,分子量为52 kDa。 该酶在 Tn 抗原和 α1-3 连接末端 GalNAcs 上均显示活性。在这里,我们展示了如何使用GalNAcEXO来表征复杂的生物制药。
在这里,Genovis分析了 C1 抑制剂——一种人血浆衍生的生物zhiliao药物,由 6 种 N-聚糖和多达 28 种 O-聚糖修饰,主要由唾液酸he心 1 结构组成。在不对这种高度异质的蛋白质进行任何预处理的情况下,反相LC-MS分析产生了无法详细解释的复杂质谱图。在天然条件下使用OmniGLYZOR Microspin色谱柱,可在3小时内有效去除所有O-聚糖。然而,蛋白质上仍残留着 1 到 3 个 N-聚糖。使用冻干的PNGase F和OmniGLYZOR试剂盒中包含的MS友好型RapiGest™ SF表面活性剂*,在变性条件下通过额外的去糖基化步骤去除这些不可接近的N-聚糖。观察到所有聚糖的完全去除,但分子上存在的少量he心 2 O-聚糖除外。水解O-聚糖的酶不会从变性中获益,这就是为什么OmniGLYZOR Microspin色谱柱只能在非变性条件下使用的原因。O-糖基化生物制药(如依那西普)表征:PNGase F、OglyZOR。
FucosEXO中的酶在大肠杆菌中表达,带有His标签,分子量为87 kDa和64 kDa。FucosEXO在天然条件下水解糖蛋白上的岩藻糖,在6至8的pH值范围内显示出高活性,无需辅助因子或添加剂。1. 用于方法开发的灵活格式;2. 可以结合酶以提高效率;3. 适用于自动化工作流程;4.即用型 - 只需加水即可。Genovis的FucosEXO 是 α-岩藻糖苷酶的混合物,用于在 N-和 O-糖基化蛋白或游离寡糖上有效水解 α1-2、α1-3 和 α1-4-连接的岩藻糖。人血清中 O-糖蛋白的富集:GlycOCATCH还可用于从复杂的样品混合物(如人血清)中选择性富集O-糖基化蛋白。简而言之,用Genovis的SialEXO处理血清并应用于GlycOCATCH树脂。洗涤树脂,用8M尿素洗脱O-糖基化蛋白。用胰蛋白酶消化样品并使用 RP-LC-MS/MS 进行分析,并使用 Swiss Prot 数据库鉴定蛋白质列表。O-糖基化蛋白以黄色表示。SialEXO 2-3唾液酸酶,对 α2-3连接的唾液酸靶向水解。湖南冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究
OpeRATOR 是一种 O-聚糖特异性蛋白酶,可消化携带he心 1 O-聚糖的蛋白质,糖基化(he心 1)Ser 和 Thr 残基的 N 端。浙江固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶生物药物开发
G0F 抗体在 30 分钟内:半乳糖的存在会影响zhiliao性抗体引发的效应功能,为了研究抗体的作用方式,可能需要彻底去除半乳糖残留物。Genovis的GalactEXO Immobilized 的 β1-4 半乳糖苷酶活性在曲妥珠单抗上使用 30 分钟孵育证明。genovis的GalactEXO Immobilized 由强大的 GalactEXO 酶组成,该酶固定在琼脂糖珠上,并以易于使用的微离心柱形式格式化。GalactEXO是β-半乳糖苷酶的混合物,可有效去除N-和O-糖基化蛋白上的半乳糖残基。使用FabRICATOR®将抗体消化成亚基,并使用LC-MS进行分析。使用 GalactEXO 冻干和 GalactEXO 固定化都可以看到向 G0F 糖型的转变,但后者在z终制剂中没有留下酶。没有任何半乳糖基化结构表明半乳糖残基完全水解,因此LC-MS数据中任何剩余的次要峰都可以注释为亚基的糖化。没有任何半乳糖基化结构表明半乳糖残基完全水解,因此LC-MS数据中任何剩余的次要峰都可以注释为亚基的糖化。浙江固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶生物药物开发
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