DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当与细胞膜结合后其荧光强度**增强，这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色，这类染料在整个细胞膜上扩散，比较好浓度时可以使整个细胞膜染色。它们的荧光颜**分明显：DiI（橙色荧光），DiO（绿色荧光），DiD（红色荧光）和 DiR （深红色荧光）这使得他们可以用来对活细胞进行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分别用标准的 FITC和TRITC的滤光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激发，有着比DiI更长的激发波长和发射波长，在细胞和组织染色中更有价值。 DiR的红外荧光可以穿透细胞和组织，在***成像中用来示踪。PI是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，它在嵌入双链DNA后释放红色荧光。云南荧光染料DIL
小动物***成像技术（invivoimagingtechnology）是利用高灵敏度的光学检测仪器直接检测动物***体内的细胞活动和基因行为研究的一类技术，是近年来发展**快的生命科学研究方法，是**直接观察细胞和分子在体内行为的新兴技术，已广泛应用于生命科学研究的各个领域[1]。***动物体内光学成像主要采用生物发光与荧光发光两种技术。生物发光是利用荧光素酶报告基因在***内表达产生的荧光蛋白与体外注射的荧光素底物发生化学反映产生荧光。而荧光发光成像技术是将荧光物质或荧光物质标记的小分子物质如基因、细胞也可是小分子药物、抗体、纳米材料等导入到***体内，通过小动物***成像系统的激发光源激发荧光集团到达高能量状态，而后产生波长较激发光长的发射光，然后通过高灵敏度制冷CCD镜头探测到***内的发射光。通过***成像技术可以观测***动物体内**的生长和转移、炎症的发生、特定基因的表达和药物作用效果等生物学过程。云南荧光染料DILHoechst 33342是一种可透过细胞膜并对DNA染色的细胞核染色试剂，它在嵌入双链DNA后释放强烈的蓝色荧光。
一、体外生物发光试验荧光素试剂的制备：D-荧光素，钾盐，无菌纯水，完全培养基（自行配置）1、用无菌水制备100X荧光素原液（15mg/ml），轻轻颠倒摇动至荧光素完全溶解。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。2、将D-luciferin，potassiumsalt溶解于预热好的组织培养基中制备成浓度为150μg/ml的工作液。用组织培养基1∶100稀释储存液，配置工作液(终浓度150μg/mL)3、去除培养细胞的培养基图像分析前，向细胞培养板中添加1×荧光素工作液，然后进行图像分析-注射器滤膜过滤除菌，0.2μm注：成像前在37℃下对细胞进行短时间孵育可增强信号。
1.DiD，DiO，DiI，DiR和DiS细胞膜染色液制备（1）配置DMSO或EtOH储存液：储存液用DMSO或EtOH配置浓度1～5mM。注意：未使用的储存液保存在-20°C，避免反复冻融。（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5µM的工作液。注意：工作液的**终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可以从推荐浓度的十倍以上寻找比较好条件。
2.悬浮细胞染色（1）悬浮细胞密度为1×106/mL加入到工作液中。（2）在37℃培养细胞2～20分钟，不同的细胞比较好培养时间不同。（3）染色细胞试管在1000～1500转离心5分钟。（4）倾倒上清液，再次缓慢加入预温37℃的培养液。（5）重复（3），（4）步骤两次以上。 CY7 是一种 CY 染料。CY 为花菁 (Cyanine) 的缩写，是由奇数个甲基单元连接的两个氮原子组成的化合物。
荧光染料标记蛋白或肽技术是一种常见的蛋白质体外标记技术。除了GFP等荧光蛋白的融合表达外，目标蛋白还可以通过荧光染料标记直接进行下游实验操作，如***跟踪、细胞分选等。
FITC荧光标记的原理是什么？
荧光标记所依赖的化合物称为荧光材料。荧光材料是指具有共轭双键系统化学结构的化合物。当受到紫外线或蓝紫光的照射时，它可以被刺激为刺激状态。当激发状态恢复到基本状态时，它会发出荧光。蛋白质荧光标记技术利用荧光材料的共价结合在目标分子的基团上，利用其荧光特性提供研究对象的信息。 动物体内光学成像主要采用生物发光与荧光发光两种技术。苏州荧光染料IR780
PI常用于细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)的检测，常用于流式细胞仪分析。云南荧光染料DIL
本质上，有机染料的特征在于源自在整个生色团上离域的光学跃迁或源自分子间电荷转移跃迁（从激发电子态的分子内电荷转移）的发射。在这里，表现出源自在整个生色团上离域的光学跃迁的发射的染料被称为共振染料（介观染料），而后者被称为CT染料（电荷转移染料）。花青、罗丹明和荧光素是一些最常见的共振染料，其特点是窄的吸收和发射带（略微结构化），往往相互镜像，以及小的、对溶剂极性不敏感的斯托克斯位移。另一方面，CT染料包括香豆素和丹磺酰荧光团等染料，其特点是与共振染料相比，吸收和发射带结构无结构，分离良好，以及更大的斯托克斯位移。同样，与共振染料相比，CT染料具有更小的摩尔吸收系数和荧光量子产率。对于共振和CT荧光染料，在结构-性质关系众所周知的情况下，可以通过精心设计的策略来微调光谱性质。云南荧光染料DIL
