deae-葡聚糖是一种化学修饰的葡聚糖类似物。通过用二乙基氨基乙基修饰,右旋糖酐链的酰胺化很容易被质子化,这使得它可以自组装成带负电荷核酸的纳米颗粒。deae -葡聚糖是***个用于核酸转染的阳离子聚合物。早在20世纪50年代,它就极大地增强了脊髓灰质炎病毒和SV40病毒DNA在哺乳动物细胞中的转染。随后,deae -葡聚糖被广泛应用于RNA或DNA的转染。然而,由于以下原因,deae -葡聚糖并没有作为比较好候选物:转染效率远低于脂质体等其他试剂;deae -葡聚糖的细胞毒性和免疫原性不容忽视。其结构的一个共同特征是分子中存在许多带正电的基团,这些基团被质子化成带正电的聚合物。湖南合肥转染试剂
PHP是由天然来源的羟基脯氨酸(如胶原蛋白、明胶和其他蛋白质)制成的,是***个用作基因载体的聚酯。在生理环境中,PHP可以在不到两个小时的时间内失去其初始分子量的50%。然而,PHP完全分解为其等效单体需要三个月的时间,分解产物是单体羟脯氨酸。虽然PHP酯在溶液中单独存在时降解很快,但与DNA络合时更稳定。将PHP酯/pSV-gal复合物转染CPAE细胞,测定PHP酯作为基因传递载体的活性。由于聚L-赖氨酸是**常用的基因转运聚合物,PHP酯的转染效率与聚L-赖氨酸相当。转染效果随着PHP酯浓度高于DNA浓度而增加。PHP酯转染细胞的能力不受FBS存在的影响。结果表明,PHP酯是一种潜在的基因载体。辽宁阳离子转染试剂小RNA和质粒DNA的共转染可用于评估转染效率。
RNA和信使RNA与DNA转染类似,RNA可以通过基于RNA的病毒或非病毒载体导入真核细胞。与涉及DNA的转染相比,RNA转染可能产生更高的转染效率,因为后者不需要穿越核膜。在不需要基因组整合、转录和转录后处理的情况下,RNA转染也可能加速所需蛋白质的产生。使用基于信使RNA(mRNA)的载体也可以防止因整合到宿主基因组而引起的并发症,从而允许表达特定的,所需的蛋白质。然而,RNA转染后,蛋白质表达是短暂的,与DNA相比,RNA的稳定性相对较差,因此在细胞内运输时更容易降解。小RNA是长度为18-200个碱基对(bp)的RNA分子,具有调控转录后基因调控和RNA修饰的能力。小RNA包括microRNAs(miRNAs)、小干扰RNA(siRNA)、短发夹RNA(shRNA)等。microRNAs和piRNAs都是内源性单链小RNA。miRNAs(18-25bp)通过抑制目标mRNA或干扰其翻译起始,参与下游mRNA的转录后调控。与miRNAs和piRNAs类似,siRNA也在调控转录后基因表达中发挥作用。siRNA的长度通常为20-24bp,可表达为内源性或外源性双链小RNA。shRNA是一种具有发夹环的内源性双链小RNA。shRNA可以结合mRNA上的互补序列来降解它。
携带要转染的特定核酸的载体构建可以进一步分为病毒载体或质粒载体。病毒和质粒通过存在合适的真核启动子促进外源转基因的表达。病毒载体可能在宿主细胞中触发免疫原性反应,而非病毒载体的免疫原性相对较低。需要一种传递机制来促进靶向核酸或载体结构转移到宿主细胞中。其中一些需要物理方法,而另一些涉及使用递送载体,可能是脂质载体或非脂质载体,以帮助增强载体载体复合物与宿主细胞膜之间的接触,从而促进复合物进入细胞。设计和启动转染试验可能具有挑战性,特别是可供选择的转染方法或策略种类繁多的情况下。在聚葡萄糖、精胺(PG)偶联物和第四代聚酰胺树状大分子(PAMAM G4)的帮助下。
纳米颗粒在疫苗递送中往往表现出***的佐剂作用。阳离子聚合物,包括PEI、聚赖氨酸、阳离子葡聚糖和阳离子明胶,已经有报道显示出对Th1反应的强烈刺激,其特征是诱导CD4(+)T细胞增殖和th1相关细胞因子的分泌。此外,阳离子聚合物强烈抑制LPS诱导的巨噬细胞分泌TNF-α。阳离子聚合物的刺激能力与其阳离子化程度有关,阳离子聚合物与阴离子聚合物的中和可以完全消除刺激作用。聚合物的分子量也会影响其刺激能力,分子越大意味着刺激能力越大。阳离子聚合物是一种非病毒载体。内蒙古长沙转染试剂
常用的物理/机械转染方法包括电穿孔、声孔、基因显微注射和激光照射。湖南合肥转染试剂
基因注射包括通过注射将所需的核酸物质直接输送到宿主细胞核中。当细胞转染具有挑战性时,特别是当需要对宿主细胞进行遗传修饰时,这种方法是一种很好的替代方法。与其他非病毒基因传递方法一样,没有一种方法可以适用于所有不同的细胞类型,选择合适的细胞类型和核酸大小对于确保基因注射的成功至关重要。例如,先前的一项研究报道了成功生成表达cre重组酶(大小~1,000bp)的转基因小鼠细胞系。另一方面,在一项体内研究中,表达转基因的小鼠肌纤维数量与注射次数和给药质粒剂量相关。另一项体外研究进一步支持了这一观点,该研究报道了表达报告基因的宿主细胞的数量与注入细胞的核酸量密切相关。此外,微针的大小、形状和额外涂层的存在也会影响基因注射的效率,因为有报道称,涂有微颗粒的小尺寸微针(<10毫米)能够顺利地将所需的货物输送到皮肤的角质层。湖南合肥转染试剂