蛋白荧光标记技术是目前**为常见的蛋白体外标记技术,利用级联放大反应原理,将极度敏感性且易于检测的荧光素通过某个基团吸附或共价结合后,标记到特异性抗原或抗体分子上,应用荧光显微镜观察荧光标记物因增强放大效应而产生颜色、光谱等变化,以分析示踪相应抗体或抗原性质与含量的方法。该技术在具有高度精确性的荧光显微镜下,借助高度灵敏性的荧光检测,在各种生物过程中对目的蛋白进行可视化,从而通过抗原抗体高度特异性免疫定量表达或在细胞研究中定位。蛋白荧光标记已成为研究蛋白质互作、酶活性、***示踪以及细胞分选重要工具。蛋白标记常用荧光染料随着蛋白荧光标记技术不断发展,各类荧光素广泛应用于生物实验中,目前常用标记蛋白/抗体的荧光素主要有BODIPY类、香豆素类、罗丹明类、近红外类、NBD胺类以及菁染料等。南京星叶生物科技有限公司提供多种性价比高的各类活化荧光素,其荧光染料覆盖波长范围从350nm到790nm,例如Cy系列、SuperFluor系列(效果同AlexaFluor系列)等,用于标记抗体、多肽以及蛋白功能基团,继而生成分子探针,通过荧光成像进行相应检测。SUPER Green I核酸染料特点 。吉林荧光染料蓝色
与花青和罗丹明染料一样,荧光素也是一种有机染料。荧光素的比较大吸收波长为494nm,比较大发射波长为521nm(通常吸收蓝色范围内的光并发射绿色范围内的光),荧光素是一种高荧光物质。即使在非常少量的情况下也可以检测到它,并且在与抗体结合时用于显微镜检查。荧光素的衍生物包括异硫氰酸荧光素、俄勒冈绿和羧基萘并荧光素等。与许多其他荧光染料一样,荧光素价格低廉且易于使用,使其成为生物学研究中很受欢迎的染料之一。与大多数其他染料不同,荧光素在水溶液中是无毒的。因此,它是极少数用作地下水示踪剂的染料之一。云南荧光染料橙色异硫氰酸荧光素(FITC) 是一种有机荧光染料,目前,这种荧光染料仍用于免疫荧光和流式细胞术中。
InvitrogenCy3染料是一种明亮的橙色荧光染料,可使用532nm激光线激发,并使用TRITC(四甲基罗丹明)滤光片组进行可视化。除了免疫细胞化学应用,Cy3染料通常用于标记核酸。发光说明:Cy3荧光团也是亲脂性神经元和长期DiI细胞追踪试剂的基础,该试剂添加烷基尾(≥12个碳)添加到**荧光团上。Cy3染料是用于成像、流式细胞术和基因组应用的蛋白质和核酸结合物的传统橙色荧光标签。它也是经典亲脂性示踪剂DiI及其变体的基础。根据化学结构,Cy3可分为普通Cy3(常简称Cy3)和磺化Cy3(Sulfo-Cy3)。Cy3水溶性较低,在水相标记反应时常常需要使用有机共溶剂,常用有机溶剂包括DMF,DMSO和乙腈等。磺化Cy3是在Cy3的结构基础上磺化的产物,附带2个或3个磺酸根离子。由于磺化效应,磺化Cy3的亮度比Cy3稍亮,荧光稳定性也提高,可赖受更长时间的曝光。磺化Cy3水溶性极高,所以在标记反应中不需要使用有机共溶剂,特别适合标记蛋白等对有机溶剂敏感的生物分子。另外磺化Cy3水溶性极好,并且染料分子本身带电荷,标记到蛋白表面后不会引发疏水性蛋白聚集,提高荧光标记产物的稳定性。当然,磺化Cy3-NHS也可溶于甲醇,DMSO,DMF等有机溶剂,标记反应也可以在纯有机溶剂中进行。
5(6)-FITC(Fluorescein5(6)-isothiocyanate)是一种胺活性衍生物的荧光染料,具有广泛的应用,作为抗体和其他探针标记,用荧光显微镜,流式细胞仪、免疫荧光方法如ELISA和Western印迹实验。荧光素衍生物具有高吸收率、优异的荧光量子产率和良好的水溶性,是流式细胞仪和免疫荧光中生物检测**常用的荧光标记之一。**常用的荧光素包括用于标记蛋白质(特别是抗体)的异硫氰酸荧光素[5(6)-FITC)],5-FITC和用于标记肽和寡核苷酸的羧基荧光素(5-FAM和5(6)-FAM)。BIOFOUNT提供***的基于荧光素的染料、底物和偶联物,以及一系列具有针对细胞标记和检测优化的特性的质量iFluor™荧光标记染料。CY5荧光染料是一种被广泛应用于生物分子检测和荧光成像等领域的高效、稳定的荧光标记试剂。
二、***成像分析:D-荧光素,钾盐,D-PBS,不含钙、镁1、配制溶液使用无菌D-PBS(w/oCa2+;Mg2+)配制D-荧光素钾盐溶液(15mg/ml),0.22µm滤膜过滤除菌(避光),分装后于-20℃或-80℃冷冻保存,避免反复冻融。使用时4℃融化,实验前平衡至室温(避光)2、注射量取决于注射方式,具体如下:注射方式剂量静脉注射(25-27gauge针头)按10µl/g体重浓度,加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液腹腔注射(25-27gauge针头)按10µl/g体重浓度,加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液肌肉注射(27gauge针头)50µl,浓度为1-2mg/ml荧光素工作液鼻内注射(pipette)50µl,浓度为3mg/ml荧光素工作液3、注射入体内10-20min(待光信号达到**强稳定平台期),再进行成像分析CY7.5荧光染料是一种被广泛应用于生物分子检测和荧光成像等领域的高效、稳定的荧光标记试剂。吉林荧光染料蓝色
荧光染料可以单独使用,也可以组合成复合荧光染料使用。吉林荧光染料蓝色
D-荧光素是荧光素酶 (Luc) 的天然底物,可催化萤火虫产生典型的黄绿色光。该反应的 560 nm 化学发光在几秒钟内达到峰值,当底物荧光素过量时,光输出与荧光素酶浓度成正比。荧光素酶 (luc) 基因是用于研究和药物筛选的流行报告基因。化学发光技术几乎没有背景,使得 luc 报告基因成为检测低水平基因表达的理想选择。标准闪烁计数器可以可靠地测量低至 0.02 pg 的荧光素酶。除了作为基因表达报告者的作用外,荧光素酶还常用于极其灵敏的 ATP 检测中[1]。我们提供萤火虫荧光素酶 (HY-P1004)、荧光素游离酸 (HY-12591A) 及其水溶性钠盐 (HY-12591) 和钾盐 (HY-12591B)。吉林荧光染料蓝色