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案例1:人类mRNA上2’-O-RNA甲基化转录组图谱 原文:Nm-seq maps 2’-O-methylation sites in human mrna with base precision 期刊:Nature Methods 影响因子:26.9 美国芝加哥大学研究团队利用2’-O-RNA甲基化测序手段,检测mRNA分子上的甲基化位点。与m6A RNA甲基化测序数据相比,2’-O-RNA甲基化位点主要分布在转录组CDS区,其中近一半在剪接位点附近,相当一部分在内含子中发现Nm位点。三分之一的2’-O-RNA甲基化位点在AGAUC处存序列偏好性,并且跟随了5个碱基的A或G碱基高分布。有趣的是,2’-O-RNA甲基化位点富含三种氨基酸的编码密码子。总的来说,该文章揭示了2’-O-RNA甲基化在人类细胞中的分布特征。RNA抽提,RNA质控,环状RNA特异性引物设计,环状RNA逆转录。新疆服务测序

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技术简介DNA甲基化能控制基因表达,因而在动植物的生长发育过程中发挥着关键的调控作用,并且与包括ai症在内的多种人类疾病密切相关,是表观遗传学研究的热点。云序生物提供的MeDIP测序服务,将甲基化DNA免疫共沉淀技术(MeDIP)和高通量测序相结合,能够帮助客户快速地获取全基因组范围内的DNA甲基化图谱,并比较不同样品中的甲基化分布差异。配合强大的生信分析实力,我们提供的不仅是海量的测序数据,而且是根据您的研究目的,有针对性地挖掘提炼出取之即可用的结果及出版级图片。重庆测序pri-miRNA云序生物使用 diffReps 包进行差异甲基化位点的识别。

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LC-MS/MS检测核酸修饰水平实验原理:云序生物建立了一种基于LC-MS/MS平台的核酸修饰分析方法,定量4类DNA修饰(5-mdC、5-hmdC、5-fodC、6-mdA)和9类RNA修饰(m5C、m6A、Am、Gm、Cm、Um、m1A、m7G、ac4C),为表观遗传研究提供理想的技术平台。液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)能够很好的检测到极性高、稳定性差的化合物,并能够对物质进行精确的定量。LC-MS/MS法是目前所有总体甲基化水平分析方法中能够对含量极低的修饰碱基进行准确定性定量的方法;而将LCMS/MS法与一定的样品前处理方法相结合,能够更好地对各类生物样品中的DNA/RNA修饰进行检测。

核糖体印迹测序又称Ribosomeprofiling,或Ribo-seq,是运用测序手段研究翻译组学的一种主要的技术手段。该技术通过使用翻译抑制剂使正在翻译的mRNA序列固定在核糖体上。加入核酸酶处理不受核糖体保护的mRNA,分离核糖体并提取纯化核糖体上未被消化的短片段mRNA(大约30nt),进而获得正在翻译的mRNA序列。这项技术可获得实时全转录组正在翻译的序列信息,使研究者能从分子水平检测蛋白组的翻译情况,并了解蛋白质的翻译水平及翻译过程,在蛋白翻译机制的研究领域中有广阔的应用前景。核糖体印迹测序又称Ribosome profiling,或Ribo-seq。

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案例3:拟南芥m5CRNA甲基化谱及TRM4B酶对根的影响原文:Transcriptome-WideMappingofRNA5-MethylcytosineinArabidopsismRNAsandNoncodingRNAs期刊:ThePlantCell影响因子:8.23与上篇不同,本研究团队采用m5CRNA甲基化测序研究拟南芥中m5C甲基化谱,在种子,幼芽,根中发现了1000多个特异性的位点。敲低RNAm5C甲基转移酶TRM4B,造成tRNA稳定性的降低。研究人员还证实TRM4B突变体的初级根比野生型更短,同时对氧化的应激反应更敏感。云序生物采用商业化RIP试剂盒,保证了RIP实验的成功率和稳定性。福建分析测序RNA甲基化

m6A环状RNA测序,云序生物提供成熟m6A RNA甲基化MeRIP-seq服务。新疆服务测序

2'-o-甲基化样本要求 样品类型 细胞、组织或RNA,其他样本类型请电询。 样品量 a) 细胞:1×108 b) 组织:500 mg - 5g c) RNA:100 μg - 300 μg (OD260/280:1.6-2.3; RNA无明显降解) 样品运输及保存 样品运输:样品置于1.5mL离心管中,封口膜封好,干冰运输。 样品保存:细胞样品或新鲜组织块可用TRIZOL或RNA保护剂处理,液氮冻存后-80℃保存;RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中,-80℃保存,避免反复冻融。目前,环状DNA不只可以作为一种新型特异的tumour标志物,还在tumour发生和发展机理研究中发挥着重大的潜在价值。新疆服务测序

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