广西测序环状DNA测序

云序生物是国内best早提供 eccDNA 测序服务的公司，云序在2018年已就启动了组织细胞 eccDNA 测序服务的开发，随后又在国内first发血清血浆环状 DNA 测序服务。迄今为止，我们已经完成上千例样品的 eccDNA 测序，积累了丰富的项目经验，样品类型涵盖：组织﹑细胞﹑血清﹑血浆﹑尿液等，物种涵盖：人﹑小鼠﹑大鼠﹑拟南芥﹑果蝇﹑酵母﹑非洲爪蟾等。云序生物采用 A&A Biotechnology 公司的环状 DNA 纯化柱，是绝大部分环状DNA高分文章中所使用的纯化柱，并且云序生物是该品牌在国内的总代理。今年，云序生物又在港中大教授卢煜明（Y.M. Dennis Lo）发表的 Tn5 转座酶法的基础上，在全国范围内率先推出了血清血浆 eccDNA 甲基化测序服务。如果联合全转录组测序，可以将环状DNA与mRNA进行联合分析寻找相关性。广西测序环状DNA测序

尽管诸多研究成果都是基于双微体研究来进行的，但是事实上，后续研究证明并非所有的eccDNA都是以双微体的形式存在的。2017年，Nature发表了一篇first次利用高通量测序技术对17个tumour样本的大规模eccDNA研究，发现只有~30%的eccDNA是以双微体的形式存在的。同时也证明不同eccDNA在不同的tumour样本中是普遍存在的，但是含量有很大差别。接着陆续有研究发现双微体中能够携带ai症基因，如EGFR和MYC基因通过eccDNA在tumour细胞中扩增了40%（Cancer Genetics and Cytogenetics, 2008）；在胶质瘤中发现ai细胞通过形成eccDNA造成携带的EGFR和MYC基因大量扩增(PNAS, 2014)。广西测序环状DNA测序因为这些环状 DNA 存在于染色体之外，因此也得名“染色体外环状 DNA”。

ECCDNA发挥多种作用，包括细胞基因型、异质性和对环境因素的适应，如生活方式、营养和压力。因此，tumour和配对标本中tumour特异性eccDNA的特征可能有助于这些疾病的诊断和预后。best近的研究表明，eccDNA的大小分布，末端位置，末端基序和表观遗传特征有助于追踪它们的起源。EccDNAs,包括那些大于2 kb,可以作为细胞外释放自由从健康的和不健康的细胞dna生物流体在不同的情况下,可以作为新型生物标志物摆脱ai症的早期检测的新见解,对药物治疗的反应的监测和ai症生存。

目前已经报道的基于高通量测序方法研究eccDNA的报道都是基于Paul S. Mischel团队开发的AmpliconArchitect软件，基于二代全基因组测序数据（5-10X覆盖深度），该软件可自动比对基因组，寻找断点信息，并结合SV和CNV的分析结果生成eccDNA的分析结果。不过需要注意的是，目前该软件的license是收费的。不过还可以考虑通过提取环状DNA和滚环扩增的方式获得eccDNA，并进行后续的测序和组装，这时候相对于对软件依赖的限制就相对较小了，但是对于线性DNA背景的排除依然是个问题，在基因组DNA的提取、扩增、质控及后续分析方面还需要诸多探索。云序组织细胞环状DNA测序服务，采用多种方法高效地富集和扩增环状DNA，极大地提高了环状DNA的检出率。

与RNA-seq联合分析 研究发现eccDNA环化多来源于ai基因，那eccDNA对基因的表达有着怎样的影响呢？作者在这里利用RNA-seq（云序提供此服务）技术进行探究，结果并未发现小于1kb的eccDNA中的基因表达发生变化，基因表达的增加主要发生在大于1kb的eccDNA中。利用等位基因特异性表达方法分析发现高表达的基因来源于环状等位基因,但是环状DNA中基因拷贝数与环状外基因的拷贝数并无明显区别,这也表明eccDNA还存在其他与tumour相关的功能。但新的研究表明：无论是在正常体细胞还是ai细胞中，都存在大量染色体外环状DNA。平台环状DNA分子

一种新的环状RNA，CIRC-CCAC1，有助于CCA的进展，诱导血管生成，并破坏血管内皮屏障。广西测序环状DNA测序

eccDNA的大小从几百bp到几十Mb不等，其中较小的一种是2012年Science报道的被称作MicroDNA的特殊的eccDNA，大小只有200-400bp，有片段过短，因此不能携带完整的基因序列；但是目前MicroDNA被认为具有一些重要的调节功能，包括调控RNA的转录过程，或者通过分子海绵的作用调控一些非编码RNA的表达，同时这种DNA也被认为是可能在未来应用于液体活检来监测ai症的发生和发展的一种体外游离DNA的形式。双微体形式存在的eccDNA一般较大，100kb-3Mb等，很多可以在光学显微镜下被观察到，能够携带一些完整的基因结构和上游的调控序列。广西测序环状DNA测序