研究还发现,m6Am 修饰是一个可逆的动态修饰,当细胞遭遇热激、低氧等应激性刺激时 m6Am 水平上升,说明 m6Am 可能在细胞应激反应中扮演了重要角色。近来也有研究发现,除了 mRNA 的较早编码核苷酸残基以外,在 snRNA 内部也有 m6Am 甲基化修饰的分布。虽然 m6Am 修饰早在 1975 年就已经被人类发现,但由于检验手段的匮乏,科学家难以区分出 m6A 修饰与 m6A 修饰,因此直到近年来 m6Am 测序技术逐渐发展成熟,才为进一步深入研究 m6Am 这一重要的 RNA 修饰铺平了道路。m6A环状RNA测序,云序生物提供成熟m6A RNA甲基化MeRIP-seq服务。海南测序mRNA
比色法检测整体甲基化水平实验原理 比色法RNA甲基化定量检测试剂盒提供了定量检测总RNA甲基化水平的试剂。采用类似ELISA抑 制竞争免疫的方法,实验样本和RNA甲基化标准品与RNA甲基化抗体共孵育;然后转移到包被有RNA甲基化多核苷酸的条孔上。在孵育之后孔可以洗脱任何未包被的试剂然后添加检测抗体生成信号,通过微孔板读取仪(例:酶标仪)来检测。因为在样本的RNA甲基化抑 制了RNA甲基化抗体与涂抹在孔上RNA甲基化的结合,样本中更高浓度导致与在孔中的RNA甲基化结合减少。因此,从孔中测得信号或OD参数与样本中RNA甲基化的数量成反比。并且样本中RNA甲基化的量可以通过预先设定的RNA甲基化标准品来实现定量检测。吉林测序平台RNA抽提,RNA质控,环状RNA特异性引物设计,环状RNA逆转录,环状RNA qPCR检测。
样本要求: 样品类型: 细胞、组织或RNA,其他样本类型请电询。 样品量: a) 细胞:2×107 b) 组织:100 mg-1 g c) RNA:30-300 μg(OD260/280:1.6-2.3;RNA无明显降解28S:18S>1.5或RIN>7) 样品运输及保存: 样品运输:样品置于1.5mL离心管中,封口膜封好,干冰运输。 样品保存:细胞样品或新鲜组织块可用TRIZOL或RNA保护剂处理,液氮冻存后-80℃保存;RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中,-80℃保存,避免反复冻融。目前,环状DNA不只可以作为一种新型特异的tumour标志物,还在tumour发生和发展机理研究中发挥着重大的潜在价值。
ac4c样品要求 样品类型 细胞、组织或RNA,其他样本类型请电询。 样品量 a)细胞:≥2×107 b)组织:500mg - 1g c) RNA:30μg - 300μg d) 超微量满足500ng - 30μg 样品运输与保存 样品运输:样品置于1.5mL离心管中,封口膜封好,干冰运输。 样品保存:细胞样品或新鲜组织块可用TRIZOL或RNA保护剂处理,液氮冻存后-80℃保存;RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中,-80℃保存,避免反复冻融。目前,环状DNA不只可以作为一种新型特异的tumour标志物,还在tumour发生和发展机理研究中发挥着重大的潜在价值。环状RNA是新发现的一类新型非编码RNA分子。
环状DNA形成的机理 目前研究表明,环状DNA是从染色体上断裂、环化或者额外复制产生的序列,其剪切加工机理主要提出有两种可能:(1)通过染色体异位同源重组环化(intrachromatid ectopic homologous recombination,HR);(2)通过非同源染色体末端连接环化(nonhomologous end-joining,NHEJ)。环状DNA形成是一个复杂的过程,更多环化方式有待探索。针对血清血浆微量样品,云序生物参考卢煜明教授团队开发的方法,酶切去除线性DNA后,利用Tn5转座酶,打开环状DNA环状结构并同时在DNA的片段两端加上接头,进行建库及测序。每个样品组做一个Input,以去除基因组背景,降低假阳性率 。北京测序价格
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案例2:cancer基因与邻近增强子的环化共扩增 原文:Morton AR, Dogan-Artun N, Faber ZJ, et al. Functional enhancers shape extrachromosomal oncogene amplifications. Cell. 2019 Nov 27;179(6):1330-1341 期刊:Cell 影响因子:36.22 本文作者利用染色体外环状DNA测序探讨了cancer基因及其邻近增强子通过环状染色体外DNA的形式进行扩增事件,研究过程中发现了EGFR基因在成胶质细胞瘤中存在与其上游约130kb的非编码序列共同扩增的特征,EGFR基因案例表明tumour细胞中的cancer基因通过高级扩增与环化而形成的对自身调控活性的增强,是一个十分有效的促cancer机制。总之,这项研究综合利用各项计算分析和实验手段,率先揭示了增强子在cancer基因环化扩增介导的促cancer效应中所发挥的重要作用,这一机制也为抗tumour和诊断提供新的方向和理论依据。海南测序mRNA