安徽研究表观遗传组测序介绍

技术简介 DNA甲基化修饰是表观遗传研究的热点之一，我们通常认为DNA甲基化就是胞嘧啶甲基化（5-methylcytosine, 5mC），却不知道随着测序技术的快速发展，一种新的DNA甲基化修饰类型—DNA-6mA甲基化已经成为表观遗传学领域的研究热点。 云序生物率先开发了DNA-6mA测序技术—6mA-IP-seq。其原理类似于MeDIP的免疫共沉淀测序技术，利用特异性抗体富集6mA的片段，扩增后进行高通量测序及甲基化分析，以较小的数据量，快速地绘制全基因组DNA甲基化水平的图谱。ctDNA羟甲基化检测为日后通过血浆样本进行无创诊断奠定了良好的基础。安徽研究表观遗传组测序介绍

cfDNA（Cell free DNA）是人体组织排放到血液、尿液或脑脊液等循环体系中的降解的DNA小片段，是一种新型的分子标记物。ctDNA（Circulating tumor DNA）特指来源于tumsor细胞的cfDNA，是液体活检主流方向。 报道表明：ctDNA羟甲基化不但可以作为tumsor分子标志物，还可用于追溯tumsor细胞的组织来源。在医疗大趋势下，ctDNA羟甲基化检测既具有极高的科研价值，又具备推进医疗临床实践的巨大潜能，为实现tumsor临床医治的全病程管理提供强有力的支持。利用ctDNA羟甲基化测序，凭一管液体就可以进行tumsor诊断、疗效评估、实时监控、个体化用药、预测复发等，是里程碑式的新型液体活检技术。河南云序表观遗传组测序价格通过温和的酶转化法，将未甲基化的胞嘧啶（C）高效地转化为尿嘧啶（U）。

乳腺ai转移确诊后，患者已经很少能够彻底痊愈。但是现在，我们可以利用含有tumsor染色体异质性的ctDNA来对乳腺ai进行检测。在H Saal教授的研究中，他们对20例早期确诊的原发性乳腺ai患者进行了监测和长期随访。通过NGS和液体数字PCR联合使用的方法，他们能够覆盖很多低信号的全基因组测序结果，并且first发现，在手术后，ctDNA监测是高度精确的，其成功监测预示了93%的复发病人以及100%的没有复发的病人。基于ctDNA的监测中，转移患者的平均生存期是11个月，而在患者的长期不进展期的时候，是没有检测到ctDNA的。因此，ctDNA能够预测不良生存期。这些发现表明，我们可以利用ctDNA来监测早期乳腺ai患者的转移情况，并帮助修改治疗方案，避免过度医治。

游离于染色体基因组之外的DNA (extrachromosoma l DNA，ecDNA)被发现常常以环状的形式存在，这种形式的DNA被称为环状DNA (extrachromosomal circular DNA）。目前也习惯将巨大的环状DNA(>1Mb)称为ecDNA，而将相对较小的环状DNA称为eccDNA。 环状DNA连登《Nature》《Cell》等期刊，彻底颠覆了人们对基因遗传的传统认知，成为了很有潜力的科研新热点。云序生物环状DNA甲基化测序技术基于转座酶和m5C位点酶学转化方法，用核酸外切酶V消化以去除线性DNA。通过转座酶打开环状DNA的环形结构，并在DNA的片段的两端加上接头。通过Klenow酶修复转座产物的末端缺口。通过温和的酶转化法，将未甲基化的胞嘧啶（C）高效地转化为尿嘧啶（U），后续进行文库构建与高通量测序，从而获得发生甲基化修饰的环状DNA。该技术可以同时检测环状DNA和环状DNA的甲基化修饰状态，为环状DNA的深入研究及新型分子标志物的开发提供了新的技术手段。为环状DNA的深入研究及新型分子标志物的开发提供了新的技术手段。

不同于已经得到深入研究的基因组 DNA 的表观遗传修饰，ctDNA 的 5mC 甲基化修饰研究仍然是一个未被充分探索的领域，对于科研者来说是一个尚待挖掘的金矿。既然如此，那我们是不是可以按图索骥，直接将基因组 DNA 甲基化修饰研究的传统方法照搬到 ctDNA 的5mC 甲基化修饰研究上来呢？答案是否定的：因为 ctDNA 含量低、缺乏染色质结构的保护，若直接将研究基因组 DNA 的 5mC 修饰的传统方法应用于 ctDNA，则会遇到南橘北枳的困境，云序生物提供的MeDIP测序服务，将甲基化DNA免疫共沉淀技术（MeDIP）和高通量测序相结合，能够帮助客户快速地获取全基因组范围内的DNA甲基化图谱，并比较不同样品中的甲基化分布差异。cfDNA是人体组织排放到血液、尿液或脑脊液等循环体系中的降解的DNA小片段。青海技术表观遗传组测序介绍

此外，和胎儿线性DNA类似，胎儿环状DNA在分娩后从母血中迅速分离。安徽研究表观遗传组测序介绍

云序生物为您带来一种基于酶学方法的 DNA 甲基化测序技术 EM-seq（Enzymatic Methyl-seq），该方法结合使用多种酶，在保证 5mC 和 5hmC 在 Illumina 测序中仍被识别为 C 的前提条件下，将未发生修饰的胞嘧啶（C）转化为尿嘧啶（U），并在后续的扩增和测序过程中被识别为胸腺嘧啶（T）。EM-seq 有效弥补了 Bis-Seq 需要极端反应条件的缺陷，可以普遍应用于包含 ctDNA 在内的微量脆弱 DNA 样品。同时，EM-seq 得到的测序结果与 WGBS 得到的转化序列相同，因此可以使用相同的数据分析流程。运用 EM-seq 技术，需低至 10 ng 的 DNA 样品便可进行单碱基精度的全基因组 5mC 修饰测序。安徽研究表观遗传组测序介绍