ChIP-Seq(Chromatin Immunoprecipitation Sequencing)因能真实、完整地反映靶蛋白与DNA序列的结合情况,因而成为研究DNA-蛋白相互作用的经典方法。但ChIP-Seq继承了ChIP的难点与局限性:需要大量细胞投入(106-107),甲醛交联易导致假阳性或假阴性,对染色质的完整性、免疫沉淀抗体的特异性较为敏感,整体实验步骤复杂耗时长,测序数据背景信号高等,这些难点使得低投入量、低丰度的靶蛋白、弱结合DNA-蛋白质的研究变得较为困难。专业的生物信息学团队,开发了高效识别分析环状DNA的算法。中国澳门研究表观遗传组测序文章
样本要求 样品类型: 细胞、组织、体液、总gDNA或IP后DNA。其它类型样品请详询。 样品量: a)细胞 5×108 b)组织 100 mg c)IP后DNA 10ng d)gDNA 3μg 样品运输及保存: 样品运输:样品置于1.5mL Eppendorf管中,封口膜封好,干冰运输,DNA可用冰袋运输。 样品保存:细胞样品或新鲜组织块切块,液氮冻存后-80℃保存;DNA样品短期内可-20℃,避免反复冻融。云序生物提供的MeDIP测序服务,将甲基化DNA免疫共沉淀技术(MeDIP)和高通量测序相结合,能够帮助客户快速地获取全基因组范围内的DNA甲基化图谱,并比较不同样品中的甲基化分布差异。福建服务表观遗传组测序分析这种形式的DNA被称为环状DNA (extrachromosomal circular DNA)。
传统观点认为真核基因组通常形成稳定的线性染色体。但新的研究表明:无论是在正常体细胞还是ai细胞中,都存在大量染色体外环状DNA。近日,Nature杂志上发表了颠覆性研究成果:在tumsor中,主要的ai基因转录本是直接来自于环状DNA的,而环状DNA的染色质是高度开放的,环状DNA的ai基因能够大量表达,同时缺乏丝粒,导致不遵照孟德尔定律进行遗传,这种特性使得环状DNA是驱动tumsor异质性的重要机制。由此可见,由于其结构和表达的特异性,环状DNA可以影响细胞生命活动,促进tumsor细胞演进和适应性进化,增加了基因组的可塑性和不稳定性。目前,环状DNA不但可以作为一种新型特异的tumsor标志物,还在tumsor发生和发展机理研究中发挥着重大的潜在价值。可以预见的是,环状DNA将迅速成为新的科研热点,甚至会对传统遗传学和基因组学带来**性影响。
CUT&Tag技术研究蛋白质-DNA互作的优势 原文:CUT&Tag for efficient epigenomic profiling of small samples and single cells 期刊:Nature Communications 发表时间:20190429 影响因子: 11.878 在生物学研究中,DNA与蛋白质之间的互作是至关重要的,参与基因的表达、调控、复制、重组和修复以及RNA的转运、翻译和调控等多个过程,几乎涉及所有的生命活动。目前研究两者互作的方法很多,作者选择了传统的研究手段ChIP-seq,优化的CUT&RUN方法,以及新方法CUT&Tag共同研究组蛋白H3K27me3。通过比对实验结果,发现CUT&Tag有低的背景噪声以及强的信号。通过对H3K4me1修饰物进行分析,显示CUT&Tag的灵敏度高,实验可重复性好。ctDNA甲基化与ai症发展各时期关系密切,特别是ai症早期。
案例2. ATAC-seq与ChIP-seq联合分析 原文:Nfib Promotes Metastasis through a Widespread Increase in Chromatin Accessibility 期刊:Cell 影响因子:31.398 该文章是通过比较原发性和肝转移性的小细胞肺ai细胞之间的差异,从而研究人小细胞肺ai促进ai症扩散转移的背景机制。首先利用ATAC-seq,发现NFI家族转录因子富集在具有差异的染色质开放位点中,预示着NFI家族转录因子在调控tumsor细胞转移中扮演着重要角色。进一步进行ChIP-seq,通过2种测序结果联合分析,发现在染色质高开放性位点区域伴随着Nfib拷贝数量增多,且Nfib在侵袭性原发性tumsor和转移性tumsor内高表达,Nfib表现出维持染色质及远端调控区域开放和促进神经基因表达的功能,说明Nfib对促进ai细胞增殖和迁移具有重要的作用。目前也习惯将巨大的环状DNA(>1Mb)称为ecDNA。湖南云序表观遗传组测序分析
云序生物率先推出ctDNA甲基化测序服务,需1ng ctDNA既可进行测序。中国澳门研究表观遗传组测序文章
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