案例2:细胞核和线粒体编码的转录本的m1A甲基化修饰,原文:Base-Resolution Mapping Reveals Distinct m1A Methylome in Nuclear- and Mitochondrial-Encoded Transcripts,期刊:Molecular Cell 影响因子:15.59,本研究通过单碱基分辨率方法“m1A-MAP”鉴定了细胞核和线粒体中m1A甲基化修饰位点。结果发现大多数m1A甲基化修饰富集在mRNA的5’UTR,小部分符合“GUUCRA”基序的m1A位点由一个已知的甲基化酶复合物TRMT6/61A修饰。此外,线粒体编码的转录本中也有大量的m1A甲基化修饰。该研究还表明,位于5’UTR区,尤其是转录本di 一和第二位上的m1A可促进mRNA翻译,而位于编码区的m1A可抑 制翻译作用。因此,m1A测序不仅揭示了核编码和线粒体编码的转录本上不同类型的m1A甲基化修饰,还为进一步m1A甲基化功能验证提供了重要工具。全转录组水平测序揭示可逆与动态的m1A RNA修饰。密云区云序生物m1A
01 m1A RNA修饰测序,m1A RNA修饰测序(m1A-seq),对m1A RNA甲基化,目前流行的检测手段为m1A-Seq技术,适用于m1A RNA甲基化谱研究,快速筛选m1A RNA甲基化靶基因。云序可提供mRNA和多种非编码RNA的m1A测序:m1A 全转录组测序(涵盖mRNA,LncRNA,circRNA),m1A LncRNA测序(涵盖LncRNA和mRNA),m1A Pri-miRNA测序(涵盖Pri-miRNA和mRNA),m1A mRNA测序。云序生物是一家比较不错的做RNA甲基化的公司,他们的RNA甲基化口碑很好,m1A RNA甲基化是一类新发现的RNA甲基化,即RNA分子腺嘌呤第1位氮原子上的甲基化修饰(N1-methyladenosine,m1A)。东城区m1Apri-miRNA测序云序客户|华南农业大学余义勋课题组揭示植物RNA m1A修饰调控机制。
MeRIP-Seq技术服务由上海云序生物科技有限公司提供,是在已发表实验方法的基础上开发而来,方法简述如下:片段化的RNA与m1A抗体在IPP缓冲液中4度共孵育2小时。反应混合物进一步用protein A磁珠(Thermo Fisher)在4度免疫沉淀2小时。然后用游离的m1A腺苷类似物洗脱磁珠上结合的RNA。洗脱的RNA进一步通过Trizol试剂(Thermo Fisher)进行抽提。抽提纯化的RNA通过RNA建库试剂盒(NEB)建库,并在Illumina Hiseq测序仪上进行双端150bp测序。
1. m1A-MAP技术及其在tRNA中的验证,利用m1A会导致错配的特性,采用去甲基化酶AlkB来实现m1A去甲基化,对比(-)去甲基化酶和(+)去甲基化酶的结果,捕捉碱基突变的信号,来实现m1A RNA修饰位点单碱基分辨率的鉴定,为了增加检测灵敏度,作者还利用抗体富集的方式来特异性富集m1A的RNA的片段,作者将这个方法命名为m1A-MAP。在哺乳动物中,已知tRNA第9,14和58位会发生m1A RNA修饰,通过这个技术,细胞质中tRNAAsp(GUC)第9位及tRNA第58位都被检测到m1A RNA修饰,以上结果都证实该方法确实可有效单碱基分辨率的鉴定m1A RNA修饰位点。Nature:真核生物mRNA中m1A的动态修饰研究。
RNA修饰是表观遗传学中调控转录后基因表达的关键过程,目前对m6A RNA修饰的研究已进行的如火如荼,而除了m6A以外仍有多种RNA修饰类型参与调控转录后的基因表达,其中包括m1A、m5C、m7G、2’-O-甲基化修饰以及ac4C乙酰化修饰,在这些领域的研究中也不断有高分文章的出现。云序生物是国内RNA修饰测序的专业者,可针对mRNA和各种非编码RNA提供各类RNA修饰测序服务 (m6A﹑m1A﹑m5C﹑m7G﹑ac4C﹑2’-O-甲基化等)。m1A RNA甲基化是一类新发现的RNA甲基化,即RNA分子腺嘌呤第1位氮原子上的甲基化修饰(N1-methyladenosine,m1A)。生物化学表征分析显示:ALKBH1在体外或者细胞内对tRNA中的m1A甲基化都具有去甲基化活性。怀柔区m1ARNA甲基化测序
RNA甲基化位点motif分析。密云区云序生物m1A
此研究由云序生物合作客户华南农业大学余义勋课题组完成的,该课题组利用m1A-seq & RNA-seq(本实验云序提供)技术对矮牵牛花瓣中含m1A修饰的RNA进行全转录组分析,发现乙烯处理降低了花瓣mRNA m1A峰的水平。另外还发现矮牵牛tRNA特异性甲基转移酶61A (PhTRMT61A)的沉默降低了体内和体外mRNA的m1A水平,定位于细胞核内的PhTRMT61A被抑制会导致叶片发育异常。这些研究结果显示RNA m1A修饰可以作为表观转录组调控机制并在植物生长发育中起着重要作用。矮牵牛m1A峰的motif序列和结构特征,矮牵牛m1A峰的motif序列和结构特征,云序生物热门RNA修饰—m5C甲基化。密云区云序生物m1A
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