早在十九世纪后期,科学家就通过显微镜观察到了蛋白质与 DNA 直接的相互作用,从那以后,他们开始深入探索蛋白质结合并控制 DNA 的作用机制。为了研究 DPI,科学家发明了很多方法:凝胶阻滞、DNaseI 足迹实验、甲基化干扰、体内足迹、酵母单杂、ChIP-Seq 等。其中 ChIP-Seq 因其能真实、完整地反映结合在 DNA 序列上的靶蛋白,是目前全基因组水平研究 DPI 的标准实验技术。 ChIP-Seq 的基本过程包括甲醛交联将细胞内与 DNA 结合的蛋白固定,再裂解细胞,超声断裂 DNA,将 DNA-蛋白质复合物结合在特异性抗体上,再用可以结合抗体的 ProteinA 磁珠将抗体-蛋白-DNA 复合物抓取下来,之后将 DNA 与蛋白解离,将 DNA的片段补平,加 A,加接头,进行高通量测序。在治 疗过程中,ctDNA甲基化水平与ai细胞数量呈正比。陕西研究表观遗传组测序
在过去十年中,对非小细胞肺ai(NSCLC)的理解发生了重要的变化。现在证实,NSCLC具有不同的分子亚型。现在医生认为,针对NSCLC的个性化医治,应该是利用这些分子亚型匹配相对应的靶向疗法。表皮生长因子(EGFR)突变和ALK易位被认为是NSCLC医治很有效的靶点。但是EGFR和ALK的突变数量是多种多样的,并且我们检测到的突变类型还在不断地增加。因此,现代科学家们利用基于NGS的ctDNA技术,从患者血液中可以获得ROS1,BRAF,KRAS,HER2-,c-MET,RET,PIK3CA,FGFR1和DDR2的突变信息,从而利用这些突变信息为患者选择合适的靶向疗法。中国香港云序生物表观遗传组测序平台云序生物率先推出ctDNA甲基化测序服务,需1ng ctDNA既可进行测序。
报道表明:ctDNA羟甲基化不但可以作为tumsor分子标志物,还可用于追溯tumsor细胞的组织来源。在医疗大趋势下,ctDNA羟甲基化检测既具有极高的科研价值,又具备推进医疗临床实践的巨大潜能,为实现tumsor临床医治的全病程管理提供强有力的支持。利用ctDNA羟甲基化测序,凭一管液体就可以进行tumsor诊断、疗效评估、实时监控、个体化用药、预测复发等,是里程碑式的新型液体活检技术。 云序生物率先推出ctDNA羟甲基化测序服务,低需1ng ctDNA既可进行测序。客户需提供血浆,血清或体液样本,云序生物为您完成从ctDNA提取,文库制备,上机测序到数据分析整套服务流程。
案例:hMeDIP-seq揭示了心机细胞发育与肥大过程中的基因表达与5hmC有关 DNA hydroxymethylation controls cardiomyocyte gene expression in development and hypertrophy[J].Greco C M, Kunderfranco P, Rubino M, et al . Nature Communications, 2016, 7:12418. 5-hmC(DNA羟甲基化)在基因体上富集能够激huo基因的转录调控,但对启动子和远端调节区的功能不太清楚。本文主要是以不同发育时间点和心肌肥大的心肌细胞为实验载体,主要剖析5-hmC在心肌细胞(CMC)基因组中的分布,并揭示了5-hmC在心脏发育和疾病中的作用机制。1)通过DNA羟甲基化测序,作者发现在心脏发育过程中,CMCs中的5-hmC在基因间区域逐渐减少,并向GB上富集(图1)。2)通过DNA羟甲基化和转录组关联分析,作者得出5-hmC是CMCs发育和肥大过程中的重要调控因子(图2)。客户只需提供血清血浆,云序生物为您完成环状DNA富集,甲基化位点转化。
ATAC测序的全称是Assay for Transposase Accessible Chromatin using sequencing,运用测序手段研究转座酶可接近的染色质的一种技术。该技术通过转座酶对某种特定时空下开放的核染色质区域进行切割,进而获得在该特定时空下基因组中活跃转录的调控序列。这项技术只需少量细胞便可获得实时全基因组活性调控序列信息,应用于转录因子结合分析、核小体定位、活性调控元件分布等研究,在表观遗传机制研究领域有广阔的应用前景。 云序生物对染色质开放区域进行研究的技术是利用ATAC测序技术,其原理为:利用DNA转座酶可以携带DNA去识别染色质开放区域。人为地将携带已知DNA序列标签的转座复合物(即带着测序标签的转座酶),加入到细胞核中,再利用已知序列的标签进行建库后测序,从而识别染色质的开放区域。环状DNA连登《Nature》《Cell》等期刊,彻底颠覆了人们对基因遗传的传统认知。山西云序表观遗传组测序文章
该团队基于转座酶和m5C位点酶学转化方法开发出了环状DNA甲基化测序技术。陕西研究表观遗传组测序
DNA甲基化是基因组一种主要的表观遗传修饰形式,它能够调控基因表达、染色质稳定性、X染色体失活及抑制病 毒和外源基因的表达等生物过程,与人类的ai症、衰老、老年痴呆等许多疾病密切相关,是表观遗传学研究中的热点之一。 云序生物提供新一代的DNA甲基化芯片Illumina Infinium MethylationEPIC BeadChip测序服务(下文中以850K芯片代称)。850K甲基化芯片有效的利用高通量筛选技术,不但实现基因区域和CpG岛的覆盖,还包括 CpG 岛之外的甲基化位点、在人类干细胞中鉴定出了非 CpG 甲基化位点、miRNA 启动子区域、以及tumsor和正常组织中差异表达的甲基化位点等。普遍应用于ai症、tumsor和其他复杂疾病的研究,是目前适合表观基因组全关联分析研究的全基因组DNA甲基化芯片。陕西研究表观遗传组测序
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