外泌体(Exosomes)来源于晚期核内体(也称为多囊泡体)的囊泡,是由活细胞分泌而来,是一类大小介于30-200nm的含有DNA、RNA、蛋白质和脂类的微囊,几乎所有类型的细胞都能分泌,普遍存在于血清、血浆 、尿液等各种体液中。Exosomes 参与调控重要的细胞生理活动,在免疫应答、凋亡、血管生成、炎症反应、凝结过程中的作用均有报道,成为多种疾病医治的潜在靶点、早期诊断标记物、靶向药物载体等,成为近年来生命科学及医学领域的重要研究热点。外泌体在病毒和朊蛋白等多种病原体之间起着独特的作用。云南上海云序外泌体
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外泌体(Exosome)可以由多种类型的细胞(免疫细胞、心血管细胞、神经细胞、干细胞、tumour细胞)释放到体液环境和组织间隙中。Exosome中含有细胞特异的蛋白质、脂质和核酸,能作为信号分子传递给其他细胞从而调控其他细胞的生物活性与功能。越来越多的研究表明,Exosome在多种疾病的发生和发展、诊断和医治中发挥重要作用,Exosome已成为生物医学乃至植物学与微生物学研究的方向,受到普遍的关注。外泌体中的非编码RNA,包括短链非编码RNA(microRNA/miRNA)、长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA),环状RNA(circular RNA,circRNA)等介导了外泌体的诸多功能,是外泌体研究中的重要关注对象。
外泌体是细胞分泌的50-150nm粒径大小,并具有磷脂双分子层结构的微囊泡。由于外泌体是从母本细胞内部分泌出来,因此会带有母本细胞特定的遗传物质(蛋白、核酸等)。同时,外泌体的磷脂双分子层与普通细胞膜具有同源性,很容易被其母本细胞同类的或异类的细胞摄取,进而释放遗传物质进入这些摄取外泌体的细胞内部。由于上述特性的存在,外泌体无论在疾病诊断、微环境调控机制还是在药物载体改造等方面都受到了越来越多的关注,国自然资助的项目数和总金额也逐年攀升,占据近2年生物医学研究热点的榜首。样品运输:样品置于1.5mLEppendorf管中,封口膜封好,干冰运输。
外泌体蛋白有以下几类:外泌体中常见的蛋白质多与其生物发生机制有关,外泌体含有的细胞质蛋白,如膜蛋白和RAB蛋白,可以促进MVBs与细胞膜的融合及外泌体的释放;Tsg-101及附属蛋白质Alix参与ESCRT过程,促进内体膜的凹陷。外泌体含有参与抗原呈递的蛋白质,如CD1、MHCⅠ和MHCⅡ,其在免疫调节中发挥重要作用,MHCⅠ还参与向T细胞呈递抗原的生理过程。外泌体表面还存在热休克蛋白,如HSP70和HSP90,促进了抗原肽与MHCⅠ及MHCⅡ的结合。外泌体含有信号转导蛋白,如G蛋白和蛋白激酶。外泌体含有丰富的蛋白水解酶,这表明外泌体能够促进细胞转移。外泌体中还含有细胞质微管蛋白、肌动蛋白和肌动蛋白结合蛋白。但目前未发现外泌体中含有与内质网、高尔基体和细胞核相关的蛋白质。通过商业化kit富集环状RNA,极大地提高了有效数据比例。重庆修饰外泌体LncRNA测序
密度梯度离心法:用此种方法分离到的外泌体纯度较高,但是前期准备工作繁杂。云南上海云序外泌体
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