技术简介 DNA甲基化能控制基因表达,因而在动植物的生长发育过程中发挥着关键的调控作用,并且与包括ai症在内的多种人类疾病密切相关,是表观遗传学研究的热点。 云序生物提供的MeDIP测序服务,将甲基化DNA免疫共沉淀技术(MeDIP)和高通量测序相结合,能够帮助客户快速地获取全基因组范围内的DNA甲基化图谱,并比较不同样品中的甲基化分布差异。配合强大的生信分析实力,我们提供的不仅是海量的测序数据,而且是根据您的研究目的,有针对性地挖掘提炼出取之即可用的结果及出版级图片。甚至会对传统遗传学和基因组学带来**性影响。辽宁项目表观遗传组测序是什么
案例1:ctDNA羟甲基化可作为人类ai症诊断的分子标志物 期刊:Cell Research 影响因子:15 本篇文章的作者是复旦大学华山医院的刘杰教授课题组与芝加哥大学何川教授课题组合作通过检测不同ai症样本中ctDNA羟甲基化分布和水平。本文通过ctDNA羟甲基化检测技术,在全基因组范围内,检测ai症与健康人中ctDNA羟甲基化的水平。检测的ai症类型包括肠ai,胃ai,胰腺ai,肝ai,甲状腺ai,检测组织类型包括ai症及ai旁组织,血浆和白血球。结果发现,5hmC主要分布在基因组的转录活性区,可能与开放染色质和允许组蛋白修饰相关。同时,5hmC对特定ai症类型高敏感,如肠ai和胃ai。总的来说,ctDNA羟甲基化检测为日后通过血浆样本进行无创诊断奠定了良好的基础。分析表观遗传组测序平台ctDNA羟甲基化检测为日后通过血浆样本进行无创诊断奠定了良好的基础。
1)样品类型:tumsor患者的血浆、血清或 cfDNA。 血浆和血清相比较而言,推荐使用血浆,以减少淋巴细胞来源的 cfDNA 干扰。 2)样品量:血浆>5mL;血清>10mL;cfDNA>10 ng。 3)血浆提取: 使用 EDTA 抗凝管收集全血,切勿冷冻保存,只能在 2-8℃ 冰箱短暂存放,并尽快进行低温离心获取血浆。 若不能进行低温离心,则需要使用添加专有稳定剂的 STRECK 无创管来保存全血,可在常温条件下离心。 为了消除残留的细胞,血浆需要进行二次离心:first在 4℃ 条件下以 1600g 离心 10 分钟;第二次在 4℃ 条件下以 16000g 离心 10 分钟。 4)样品保存:血浆、血清样品液氮速冻后 -80℃ 冰箱保存。样品保存期间避免反复冻融。 5)样品运输:封口膜封好样品,干冰运输。
多次实验之间的一致性更高 EM-seq 文库在不同起始量之间的相关性都很高,表明 EM-seq 检出的数据具有很好的可重复性,且甲基化检测灵敏度不会随着起始量的减少而降低;相形之下,不同的 WGBS 文库之间的相关性就不够理想。更精准地检测转录起始位点的甲基化数据 在低表达基因的转录起始位点附近,胞嘧啶一般会发生甲基化修饰,但由于 WGBS 法倾向于低估 GC 区域,因此难免遗漏一些转录起始位点附近的甲基化修饰;EM-seq 因为其出色的 GC 覆盖均一性,可以更精准地检测转录起始位点的甲基化数。ctDNA甲基化基因的有效性(AUC:0.816)远高于传统分子标志物AFP(AUC:0.969)。
1、DNA甲基化富集峰的识别 通过高通量测序和生物信息分析,识别甲基化富集的基因组区域,默认p <= 1e-5(具体参数以报告为准,云序生物会根据数据,适当调整参数)的峰为统计上明显的甲基化区 注:每个样品组做一个Input,以去除基因组背景,降低假阳性率 2、DNA甲基化区域富集峰的注释 富集峰识别后,得到的是一堆基因组位置信息,通过生物信息分析利用邻近基因对富集峰进行注释,并根据峰中点相对于已知基因的位置,将富集峰为启动子峰、上游峰、内含子峰、外显子峰、基因间峰目前也习惯将巨大的环状DNA(>1Mb)称为ecDNA。江西表观遗传组测序分子
客户只需提供血清血浆,云序生物为您完成环状DNA富集,甲基化位点转化。辽宁项目表观遗传组测序是什么
为了研究 DPI,科学家发明了很多方法:凝胶阻滞、DNaseI 足迹实验、甲基化干扰、体内足迹、酵母单杂、ChIP-Seq 等。其中 ChIP-Seq 因其能真实、完整地反映结合在 DNA 序列上的靶蛋白,是目前全基因组水平研究 DPI 的标准实验技术。 ChIP-Seq 的基本过程包括甲醛交联将细胞内与 DNA 结合的蛋白固定,再裂解细胞,超声断裂 DNA,将 DNA-蛋白质复合物结合在特异性抗体上,再用可以结合抗体的 ProteinA 磁珠将抗体-蛋白-DNA 复合物抓取下来,之后将 DNA 与蛋白解离,将 DNA的片段补平,加 A,加接头,进行高通量测序。 然而,由于 ChIP-Seq 实验过程中的甲醛交联、染色质片段化、免疫共沉淀以及文库构建等步骤繁琐且条件难以控制,常规 ChIP-Seq 实验需要大量细胞,且实验重复性差、信噪比低。辽宁项目表观遗传组测序是什么
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