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全基因组重亚硫酸盐测序法（Whole Genome Bisulfite Sequencing, WGBS）一度是 DNA 5mC 测序的金标，可以将未经化学修饰的胞嘧啶（C）转化为尿嘧啶（U），并在后续的扩增和测序过程中被读取为胸腺嘧啶（T），同时保持甲基化修饰的 5mC 和羟甲基化修饰的 5hmC 在测序中仍被读取为 C。然而，WGBS 法需要极端的温度和化学环境，容易造成 DNA 的断裂降解；并且，WGBS 法对未经化学修饰的胞嘧啶（C）具有高比例的破坏力，致使 GC 富集区相比于 AT 富集区更容易丢失，在测序文库中造成“GC 覆盖度偏误”。 由于 ctDNA 含量低、稳定性差，若采用 WGBS 法对 ctDNA 进行 5mC 测序，将会难以避免地带来很多负面影响： 经化学处理后所得的 DNA 总量低，难以满足测序文库所需的量； DNA 丢失严重，覆盖度低，容易造成测序缺口（gap）； GC 检测覆盖程度不均一，未能反应真实情况。游离于染色体基因组之外的DNA被发现常常以环状的形式存在，这种形式的DNA被称为eccDNA。宁夏平台表观遗传组测序内容

CUT&Tag 技术的基本原理为：在抗体引导下，ChiTag 酶在目的组蛋白修饰标志、或转录因子、或染色质调控蛋白结合染色质的局部进行目的 DNA 的片段化，同时添加测序接头，并释放到细胞外，而绝大部分无关的染色质还留在细胞核内，因而整个实验的信噪比大幅提高，同时简化了实验步骤。该方法可一管式高通量应用，并可与单细胞测序平台"无缝"结合。ChiTag 酶在打断基因组的同时加上接头，不需要繁琐的补平加 A 加接头，在一个工作日内可以完成从细胞到测序文库制备全流程。重庆表观遗传组测序内容后续进行文库构建与高通量测序，从而获得发生甲基化修饰的环状DNA。

人体血液循环系统中，含有不断流动的携带一定特征（包括突变，缺失，插入，重排，拷贝数异常，甲基化等）的，来自tumsor基因组的DNA的片段。这些DNA的片段来源于四个部分：1、坏死的tumsor细胞；2、凋亡的tumsor细胞；3、循环tumsor细胞；4、tumsor细胞分泌的外排体。自1977年人类发现ctDNA以来，对其的研究就从未中断过。在1994年，研究人员鉴定了来源于tumsor的含有cancer标志性突变的DNA。加上ctDNA的无创性和易获得性，在其中发现的tumsor标志物，被认为可以用于检测tumsor早期诊断，进展过程，预后判断及个性化用药指导。但是由于ctDNA在人体血液内含量极低，只有循环DNA的1%，甚至万分之一，其测序检测存在巨大的挑战。

报道表明：ctDNA羟甲基化不但可以作为tumsor分子标志物，还可用于追溯tumsor细胞的组织来源。在医疗大趋势下，ctDNA羟甲基化检测既具有极高的科研价值，又具备推进医疗临床实践的巨大潜能，为实现tumsor临床医治的全病程管理提供强有力的支持。利用ctDNA羟甲基化测序，凭一管液体就可以进行tumsor诊断、疗效评估、实时监控、个体化用药、预测复发等，是里程碑式的新型液体活检技术。 云序生物率先推出ctDNA羟甲基化测序服务，低需1ng ctDNA既可进行测序。客户需提供血浆，血清或体液样本，云序生物为您完成从ctDNA提取，文库制备，上机测序到数据分析整套服务流程。客户需提供血浆，血清或体液样本，云序生物为您完成从ctDNA提取。

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ai症组中ctDNA甲基化水平与正常组差异明显。宁夏平台表观遗传组测序内容

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