ctDNA/cfDNA 之所以引起学界这么大的研究热情,与其在临床上广阔的应用前景是分不开的。相比于目前tumsor诊断当中普遍使用的组织活检,ctDNA 测序对患者的伤害小,且可以多次、实时地进行提取检测,在临床运用上具有极大的优势,有助于ai症的早发现、早医治,被誉为“液体切片活检”。ctDNA 的甲基化检测,同时结合了 ctDNA 测序于 DNA 甲基化测序的优势,在ai症检测方面提供更好的特异性和灵敏度。在 2021 年,已有 ctDNA/cfDNA 甲基化测序相关的商业化产品面市作者还发现血浆中的胎儿 环状DNA 与母体 环状DNA 相比甲基化程度相对较低。上海技术表观遗传组测序文章
为了研究 DPI,科学家发明了很多方法:凝胶阻滞、DNaseI 足迹实验、甲基化干扰、体内足迹、酵母单杂、ChIP-Seq 等。其中 ChIP-Seq 因其能真实、完整地反映结合在 DNA 序列上的靶蛋白,是目前全基因组水平研究 DPI 的标准实验技术。 ChIP-Seq 的基本过程包括甲醛交联将细胞内与 DNA 结合的蛋白固定,再裂解细胞,超声断裂 DNA,将 DNA-蛋白质复合物结合在特异性抗体上,再用可以结合抗体的 ProteinA 磁珠将抗体-蛋白-DNA 复合物抓取下来,之后将 DNA 与蛋白解离,将 DNA的片段补平,加 A,加接头,进行高通量测序。 然而,由于 ChIP-Seq 实验过程中的甲醛交联、染色质片段化、免疫共沉淀以及文库构建等步骤繁琐且条件难以控制,常规 ChIP-Seq 实验需要大量细胞,且实验重复性差、信噪比低。重庆修饰表观遗传组测序平台甚至会对传统遗传学和基因组学带来**性影响。
EM-seq 的优势相比于传统的WGBS 拥有多种优势: DNA 测序文库质量高、所需 DNA 起始量小 相比于WGBS,EM-seq 对 DNA 的损伤小,因此可以用更少 DNA 样品、更少的 PCR 轮数扩增出高质量的测序文库。云序生物提供的 EM-seq 服务,所需的 DNA 起始量可低至10ng。 DNA 文库的插入片段更长、更完整 相比于WGBS,EM-seq 处理后的 DNA的片段更完整,长度更长,避免产生测序缺口。出色的 GC 覆盖均一性 无论 GC 程度高低,EM-seq 的覆盖度都有均匀且优良的表现;相比之下,WGBS 测序文库高估了 AT 区,却低估了 GC 区,造成“GC 覆盖度偏误”。
样本要求 样品类型: 细胞、组织、体液、总gDNA或IP后DNA。其它类型样品请详询。 样品量: a)细胞 5×108 b)组织 100 mg c)IP后DNA 10ng d)gDNA 3μg 样品运输及保存: 样品运输:样品置于1.5mL Eppendorf管中,封口膜封好,干冰运输,DNA可用冰袋运输。 样品保存:细胞样品或新鲜组织块切块,液氮冻存后-80℃保存;DNA样品短期内可-20℃,避免反复冻融。云序生物提供的MeDIP测序服务,将甲基化DNA免疫共沉淀技术(MeDIP)和高通量测序相结合,能够帮助客户快速地获取全基因组范围内的DNA甲基化图谱,并比较不同样品中的甲基化分布差异。ctDNA甲基化不但可以作为tumsour分子标志物,还可用于追溯tumsour细胞的组织来源。
云序生物为您带来一种基于酶学方法的 DNA 甲基化测序技术 EM-seq(Enzymatic Methyl-seq),该方法结合使用多种酶,在保证 5mC 和 5hmC 在 Illumina 测序中仍被识别为 C 的前提条件下,将未发生修饰的胞嘧啶(C)转化为尿嘧啶(U),并在后续的扩增和测序过程中被识别为胸腺嘧啶(T)。EM-seq 有效弥补了 Bis-Seq 需要极端反应条件的缺陷,可以普遍应用于包含 ctDNA 在内的微量脆弱 DNA 样品。同时,EM-seq 得到的测序结果与 WGBS 得到的转化序列相同,因此可以使用相同的数据分析流程。运用 EM-seq 技术,需低至 10 ng 的 DNA 样品便可进行单碱基精度的全基因组 5mC 修饰测序。客户需提供血浆,血清或体液样本,云序生物为您完成从ctDNA提取。天津文章 表观遗传组测序结果
游离于染色体基因组之外的DNA 被发现常常以环状的形式存在。上海技术表观遗传组测序文章
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