广东云序生物外泌体研究

目前，外泌体的分离多采用超速离心、磁珠免疫捕获、沉淀或过滤三种方法。 超速离心：耗时耗力，往往需要8-30个小时；每次较多只能处理6个样品；需要大量的起始材料；产量不高。需一台超速离心机。 将欲提取的细胞培养上清液10ml，在4 ℃的环境下，300×g 10min，2000×g 20min，弃沉淀，去除细胞；然后 l0,000×g 30min ，弃沉淀，去除亚细胞成分；再用10,000×g 60min，弃掉上清液，较后所得沉淀既为exosome ，用30ml PBS 溶液重新悬浮沉淀物，混匀后再以10,000×g 60min，用 l ml PBS溶液悬浮沉淀物提纯的exosome 溶液分别装入eppendorf 管内，置于-80℃冰箱内保存备用。一些LncRNA可以通过与miRNA结合，调节miRNA靶基因的表达。广东云序生物外泌体研究

外泌体的分离方法包括差速离心法、ExoQuick外泌体快速提取试剂盒法、免疫亲和沉降法、蔗糖密度梯度-超速离心法和微流体分离法等。其中差速离心法是较常用的外泌体分离方法，即通过较低的离心速度从培养基中分离出颗粒较大的物质，然后外泌体、小胞外囊泡及蛋白质再以非常高的速度(100 000×g)离心产生沉淀。因此，差速离心只能富集而不能纯化外泌体。富集的外泌体、小胞外囊泡及蛋白质通过生物化学、质谱或电子显微镜等相关技术进行物理、化学及生物表征，从而得到进一步鉴别。福建云序生物外泌体LncRNA测序常规的转录组测序采用Oligo d(T)法纯化带Poly(A)尾巴的RNA分子。

外泌体（Exosomes）是一种直径在40～100 nm的圆形单层膜结构，是细胞外泌囊泡中体积较小的一种。外泌体可被大多数细胞分泌，并分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液中。外泌体中不仅包含蛋白质成分，还包括一些RNA成分，如微小RNA ( microRNA，miRNA)、长链非编码RNA和mRNA、环状RNA（circular RNA，circRNA）。外泌体所携带的这些RNA统称为外泌体来源RNA，具有完整的序列结构和生物活性。外泌体中大约含几百种miRNAs，通过外泌体miRNA测序，研究人员可获得与疾病相关的遗传特征（生物标志物），为将来tumour医治领域通过液体活检来寻找有效药 物。

外泌体（Exosomes）来源于晚期核内体（也称为多囊泡体）的囊泡，是由活细胞分泌而来，是一类大小介于30-200nm的含有DNA、RNA、蛋白质和脂类的微囊，几乎所有类型的细胞都能分泌，普遍存在于血清、血浆 、尿液等各种体液中。Exosomes 参与调控重要的细胞生理活动，在免疫应答、凋亡、血管生成、炎症反应、凝结过程中的作用均有报道，成为多种疾病医治的潜在靶点、早期诊断标记物、靶向药物载体等，成为近年来生命科学及医学领域的重要研究热点。外泌体无论在疾病诊断、微环境调控机制还是在药物载体改造等方面都受到了越来越多的关注。

转移导致绝大多数的结直肠ai（CRC）相关死亡，但目前对CRC原发灶中转移起始细胞的具体特征和潜在机制知之甚少，而环状RNA（circRNAs）是否参与其中也尚不明确。来自中山大学的谢丹研究团队较新发表在Molecular Cancer的研究揭示了名为circLONP2的环状RNA（circRNAs）在CRC进展过程中是关键的转移启动分子。circLONP2通过调控miR-17的细胞内成熟和细胞间转移，导致原发部位的转移启动能力扩散，加速tumour细胞跨器guan转移。circLONP2或可作为CRC医治中的预后预测因子和新的抗转移医治靶点。外泌体对凝血和血管生成其促进作用。江苏上海云序外泌体分析

在神经系统和精神疾病，中医学及其他领域也有不少外泌体相关项目中标。广东云序生物外泌体研究

外泌体在细胞间通讯中发挥重要作用，可以影响细胞的多种功能，包括细胞因子的产生、细胞增殖、细胞凋亡和代谢等。目前认为，外泌体主要通过以下方式与受体细胞结合：①外泌体将膜蛋白或其内容物转移至受体细胞，被受体细胞膜完全吞噬，这一过程需要非常规脂质LBPA和附属蛋白质Alix；②外泌体膜与受体细胞膜直接融合；③外泌体上的跨膜蛋白直接作用于受体细胞膜表面的信号分子。例如，滤泡树突细胞分泌的外泌体携MHC-跨膜蛋白，其可刺激B淋巴细胞和T淋巴细胞表面的信号分子。外泌体与受体细胞以何种方式结合取决于外泌体的大小及外泌体携带的物质。广东云序生物外泌体研究

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