广州鼠尾胶原

鼠尾胶原：鼠尾胶原是一种天然培养基和一种天然的黏附剂。实验设备及材料：大鼠尾巴、剪刀、镊子、止血钳、弯头吸管、平皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、天平、生理盐水、75%酒精、0.1%醋酸溶液、盖玻片、培养瓶、钻石笔、鼠尾胶原。 实验内容：1、制备鼠尾胶原（两个同学一组操作）。2、切割小玻片。3、利用鼠尾胶原将小玻片固定于培养瓶内。制备鼠尾胶原：1、取大鼠尾巴洗净，75%酒精浸泡5分钟；2、手持尾巴，用止血钳夹住鼠尾的，折断尾骨后拉出尾腱；3、将尾腱剪断置于平皿中，生理盐水浸泡；4、重复步骤2、3，直至尾腱量够用；5、吸去生理盐水，将尾腱称重（0.5-1克）；6、将尾腱置于平皿内剪碎，转移至三角烧瓶中；7、按每克尾腱50ml的比例，加入0.1%醋酸溶液；8、摇晃，使尾腱分散于醋酸溶液中，4℃放置一星期；9、离心，4000转/分，10-15分钟；10、吸取上清，分装成小瓶，4℃保存。鼠尾胶原，是一种细胞支持物，它是细胞外基质的主要成份。广州鼠尾胶原

I型鼠尾胶原是借鉴Navneeta Rajan, Jason Habermehl法，经过乙酸抽提、离心、灭菌、透析等步骤制备得到的高纯度、高活性胶原蛋白，属于医药级别产品，可用于包被细胞培养器皿（单分子层包被），适合多种类型细胞的贴壁如肝脏细胞、神经节细胞、胚胎细胞、肌细胞、肺细胞、神经鞘细胞等。I型胶原蛋白包被细胞培养板，规格为6/24孔板，表面经I型胶原蛋白包被，可以很好的降低蛋白质的吸附。使用这种细胞培养板培养细胞，可以获得良好的细胞贴壁率，细胞增殖速度快，形态均一，细胞培养成功率高。太原鼠尾胶原厂家推荐使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液对初步处理的鼠尾腱进行酶解。

鼠尾胶原：1实验制备：实验设备及材料：大鼠尾巴、剪刀、镊子、止血钳、弯头吸管、平皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、天平、生理盐水、75%酒精、0.1%醋酸溶液、盖玻片、培养瓶、钻石笔、鼠尾胶原。 实验内容：1、制备鼠尾胶原（两个同学一组操作）。2、切割小玻片。3、利用鼠尾胶原将小玻片固定于培养瓶内。实验步骤：制备鼠尾胶原：1、取大鼠尾巴洗净，75%酒精浸泡5分钟；2、手持尾巴，用止血钳夹住鼠尾的较高，折断尾骨后拉出尾腱；3、将尾腱剪断置于平皿中，生理盐水浸泡；4、重复步骤2、3，直至尾腱量够用；5、吸去生理盐水，将尾腱称重（0.5-1克）。

鼠尾胶原蛋白I型，用那一种胶原酶可以溶解：1．将胶原加入到0.1M 的醋酸中，制备成浓度为0.1%的溶液。在室温中搅拌1-3小时直到完全溶解。2．建议将溶液转移到拧口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底铺上一层氯仿。氯仿的量约为胶原溶液的10%。不要晃动或搅拌。在2-8度中放置过夜。在无菌条件下转移上层的胶原溶液。我们不建议用过滤的方法无菌化。已经发现该方法会导致丢失蛋白。3．稀释一定数量的胶原溶液。 4．按照6-10ug/cm2的浓度包被培养瓶。在室温或37度结合数小时或者2-8度过夜。5．从包被表面除去多余的液体。过夜干燥。如果胶原溶液不是无菌的，这时候可以在无菌细胞操作室中暴光在紫外线下过夜消毒。 在接种细胞前用无菌的水漂洗。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁，涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录，并且制作简便，成本低廉。整个操作请于冰上进行，因室温下鼠尾胶原I可迅速成胶。

鼠尾胶原包被培养板：胎干细胞在体外可诱导分化为血管内皮细胞,进而形成血管,因而成为血管组织工程理想的种子细胞来源之一。目的:探讨建立定向诱导人胚胎干细胞向血管内皮细胞分化的方法。方法:在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上培养人胚胎干细胞H1,将H1细胞团块转移到鼠尾胶原包被的培养板,贴壁24-48h后,培养基换为含不同辅助因子和内皮细胞生长添加剂的EGM-2内皮细胞培养基。结果与结论:①在EGM-2内皮细胞培养基诱导下,细胞逐步表达内皮细胞特异性标记基因VEGFR-2、PECAM1、vWF、CD34、VE-cadherin、GATA-2。②分化细胞表达内皮细胞特异性标记VE-cadherin、CD31。③分化细胞具有吞噬低密度脂蛋白功能。说明将人胚胎干细胞接种在鼠尾胶原包被培养板上,通过EGM-2内皮培养体系诱导,可直接分化为功能性血管内皮细胞。为研究胞外基质对诱导胚胎干细胞血管内皮细胞分化的作用以及相关信号分子机制打下了基础。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁，涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录，并且制作简便，成本低廉。一种生物医用鼠尾胶原蛋白的提取方法，采用酸法与酶法相结合的工艺。厦门长沙鼠尾胶原

胶原蛋白就像骨骼中的一张充满小洞的网，它会牢牢地留住就要流失的钙质。广州鼠尾胶原

鼠尾胶原蛋白的获取也相当“讲究”，首先要以无毒方法捕到家鼠。取尾长20cm以上者，齐尾根部切下尾巴，洗净后浸于75%酒精中。在无菌操作下剥去鼠尾皮肤，即可见附于鼠尾骨上的4束韧带。每束韧带中，位于外面及近骨一面的为白色纤维，较光洁，微发亮。纤维之间为易碎裂的间质。而剥去下来的“纤维”，就放置在嘉兴眼库中，以供需要时及时提取。让小小的老鼠尾巴发挥其神奇的作用，以医学人严谨、踏实、不断进取的医学态度，让鼠尾胶原蛋白帮助更多的人，恢复角膜的光明，重现光明的世界。广州鼠尾胶原

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