上海ac4c环状研究

环状RNA是一种新型的非编码RNA分子，是继miRNA和长链非编码RNA之后，近两年来热门的明星分子。随着测序技术与生物信息学分析手段的高速发展，研究者们对这种明星分子有了空前的认识。环状RNA以其独特的反式剪接方式形成，普遍存在于多种生物体内，并在cancer、心血管疾病和神经退行性疾病等多种人类重大疾病发挥重要的调控作用。利用高通量测序手段，研究者们在拟南芥、小鼠、果蝇和人体内都发现了环状RNA的高度表达，证明了环状RNA在不同物种中普遍存在。1993年在小鼠精子决定基因Sry中发现环状转录。上海ac4c环状研究

作为明星分子，环状RNA的热度与日俱增。环状RNA到底火到了什么程度？从云序客户捷报频传﹑研究成果不断就可见一斑：上期我们刚刚介绍云序客户发表了世界小鼠脑创伤模型外泌体环状RNA的研究，整合了外泌体和环状RNA两大科研热点。在探索新物种的环状RNA研究上，云序客户此前更是先后发表了全世界first斑马鱼环状RNA、first篇小麦环状RNA和first篇鸡环状RNA文章，如今首篇非洲爪蟾的环状RNA文章新鲜出炉了！这一成果今年年初发表在《Chemosphere》（影响因子4.2）上！遗传环状microRNA甲基化测序可以翻译成蛋白质，但大部分是非编码RNA。

研究思路： 作者首先分离了采用除草剂处理的雄性非洲爪蟾的睾丸组织，提取RNA，通过全转录组测序检测样本中环状RNA的表达变化。结果发现405个差异表达的环状RNA，其中44条上调和361条下调，这暗示着这些环状RNA可能在AZ污染过程中发挥作用。接下来通过环状RNA定量PCR检测和RNase R耐受性实验验证了环状RNA的表达量和结构。随后通过生信分析如GO及KEGG分析对差异表达的环状RNA进行了功能预测。GO分析表明这些RNA分子主要参与19条信号通路，其中Wnt信号通路和黄体酮介导的卵母细胞成熟通路可能是AZ污染涉及的信号通路。CircRNA-miRNA互作网络图揭示了环状RNA作用靶miRNA及可能的功能。本文研究了非洲爪蟾的环状RNA表达谱，为后续分子机理详细研究提供诸多靶分子。

环状RNA作为研究持续火热的明星分子，不同于对其丰富的表达谱研究，环状RNA功能机制研究还处在起步阶段。环状RNA研究多为miRNA海绵机制，部分circRNA可竞争性结合miRNA，解除miRNA对靶基因的抑制作用，上调靶基因的表达。其实，环状RNA可以通过结合不同种类的功能蛋白，分别在转录前、后及翻译水平严格调控细胞生殖生长等过程。云序曾对环状RNA经典研究思路进行过详细解析（2018国自然研究热点一环状RNA研究深度剖析），感兴趣的老师可以查询浏览。环状RNA可直接与蛋白质结合。

技术简介 环状RNA(circular RNA，circRNA)是新发现的一类新型非编码RNA分子，其在真核细胞中的大量存在颠覆了传统的线性RNA观点，成为近两年来RNA领域中迅速升起的一颗新星。环状RNA的表达具有组织和疾病特异性，与组织发育、疾病的发生和发展密切相关。此外，环状RNA不易降解，能在血浆、唾液等体液中稳定存在，可以作为新型疾病分子标志物。当前，科研人员对这一功能性分子仍知之甚少，可见对其展开深入的研究是非常有必要的，一场科研的竞赛已悄然开始!云序生物提供的环状RNA测序服务，采用Cloudseq CircRNA Enrichment Kit，去除样本中的线性mRNA和rRNA，保留纯化后的环状RNA，因此测序获得的环状RNA有效数据量是其他测序服务供应商远远无法企及的，帮助客户以较低的成本检测到更多的环状RNA。此外，Cloudseq CircRNA Enrichment Kit覆盖几乎全部已知物种，对环状RNA的研究将不再局限于人、小鼠、大鼠等常见物种。种类繁多，而且有些circRNA高于其相应的线性RNA10倍之多。福建m5c环状RNA实时定量PCR

云序优势：一站式服务，优化的实验流程，严格的质控，专业的生物信息学分析。上海ac4c环状研究

研究思路： 本文首先基于高通量手段比较了小鼠中LT-HSC，ST-HSC和MPPs中全转录组变化，共发现156种明显性差异表达的circRNAs。表达量验证证实9个circRNA在LT-HSC中明显性上调。在细胞表型层面，发现只有干扰D430042O09Rik转录的circRNA——Cia-cGAS后，可明显改变造血干细胞的亚群分布，作者因此锚定Cia-cGAS进行机制分析。作者通过Cas-9基因敲除策略成功构建了Cia-cGAS基因敲除小鼠，在Cia-cGAS基因敲除小鼠中LT-HSC明显性减少，I型IFN表达升高。通过RNA Pull-down实验，作者发现Cia-cGAS可以与cGAS结合，cGAS-RIP实验反向证实二者之间具有直接的相互作用。后续，作者通过生信预测结合EMSA实验分析了Cia-cGAS与cGAS相互作用的位点信息。酶学研究证明，Cia-cGAS可通过结合cGAS并抑制其活性。上海ac4c环状研究

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