大多数常规的膜出芽过程是使膜从细胞器变形到细胞质中,而外泌体是由于细胞膜内吞形成内体,内体限制膜发生多处凹陷,向内出芽形成微囊泡(intraluminal vesicles,ILVs),从而转变为具有动态亚细胞结构的多囊泡体(multi-vesicle bodys,MVBs),即晚期内体。MVBs可以在内体限制膜处通过至少2种机制产生:一种是内吞体分选转运复合体机制(endosomal sorting complex required for transport,ESCRT),另一种是非依赖性的ESCRT机制。ESCRT机制由一组胞质蛋白复合物发挥作用,其能识别泛素化修饰的膜蛋白。外泌体大小均一, 直径在40~100 nm。海南云序外泌体mRNA测序
奥沙利铂耐药性是结直肠ai医治中的一大挑战,调节性T细胞(Treg)的免疫抑制作用可能在其中发挥作用。另外,外泌体中的miRNA可能作为预测化疗敏感性的潜在生物标志物。天津医科大学的巴一团队及应国光团队在Molecular Therapy上发表的一项较新研究,发现结直肠ai细胞通过外泌体分泌的miR-208b可抑制CD4+ T细胞中的PDCD4表达,以促进Treg扩增,从而导致结直肠ai小鼠模型对奥沙利铂医治的耐药性。另外,在结直肠ai患者中,miR-208b的高表达与较差的预后相关。河北云序外泌体外泌体发表的文章也绝大部分与其在tumour的形成,耐药性,检测等方面有关。
虽然研究者对细胞释放外泌体的具体过程知之甚少,但大多数含有内膜系统的哺乳动物细胞均可分泌外泌体。外泌体有多种分泌途径:一种是组成型分泌途径,例如免疫系统的B细胞、树突状细胞(DCs)和肥大细胞,对外泌体的研究大部分来自于免疫细胞,而目前在非免疫细胞中生理性外泌体的分泌很大程度上是未知的;另一种途径是通过细胞间相互作用刺激分泌外泌体,例如鼠DCs在与抗原特异性CD4+ T淋巴细胞相互作用时可分泌更高水平的外泌体[4];其他类型的细胞还可以通过钙离子载体或其他刺激分泌外泌体[5]。
外泌体的分离方法包括差速离心法、ExoQuick外泌体快速提取试剂盒法、免疫亲和沉降法、蔗糖密度梯度-超速离心法和微流体分离法等。其中差速离心法是较常用的外泌体分离方法,即通过较低的离心速度从培养基中分离出颗粒较大的物质,然后外泌体、小胞外囊泡及蛋白质再以非常高的速度(100 000×g)离心产生沉淀。因此,差速离心只能富集而不能纯化外泌体。富集的外泌体、小胞外囊泡及蛋白质通过生物化学、质谱或电子显微镜等相关技术进行物理、化学及生物表征,从而得到进一步鉴别。环状RNA(circular RNA)是近来新发现的一种非编码RNA分子,研究趋势火爆。
一类外泌体中常见的细胞质蛋白是Rabs蛋白,是鸟苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一种。它可以调节外泌体膜与受体细胞的融合,有文献报道称RAB4, RAB5和 RAB11主要出现在早期以及回收的核内体中,RAB7 和 RAB9主要出现在晚期的核内体。现有大量的研究发现外泌体中含有40种RAB蛋白。除了RAB蛋白,外泌体中富含具有外泌体膜交换以及融合作用的膜联蛋白(包括膜联蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族(CD63, CD81 和CD9))、热休克蛋白家族((HSP60, HSP70, HSPA5, CCT2 和HSP90以及一些细胞特异性的蛋白包括A33(结肠上皮细胞来源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈细胞来源)、CD86(抗原提呈细胞来源)以及乳凝集素(不成熟的树突状细胞)。外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡,参与细胞间通讯。江苏上海云序外泌体价格
外泌体可促进生物体免疫应答反应。海南云序外泌体mRNA测序
外泌体(Exosomes)是一种直径在40-100 nm的圆形单层膜结构,是细胞外泌囊泡中体积较小的一种。外泌体可被大多数细胞分泌,并分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液中。外泌体中不仅包含蛋白质成分,还包括一些RNA成分,如微小RNA ( microRNA,miRNA)、长链非编码RNA(Long non-coding RNA,LncRNA)、mRNA和环状RNA(circular RNA,circRNA)。外泌体可被大多数细胞分泌,并分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液中。外泌体中不仅包含蛋白质成分,还包括一些RNA成分。海南云序外泌体mRNA测序
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