目前,外泌体的分离多采用超速离心、磁珠免疫捕获、沉淀或过滤三种方法。 超速离心:耗时耗力,往往需要8-30个小时;每次较多只能处理6个样品;需要大量的起始材料;产量不高。需一台超速离心机。 将欲提取的细胞培养上清液10ml,在4 ℃的环境下,300×g 10min,2000×g 20min,弃沉淀,去除细胞;然后 l0,000×g 30min ,弃沉淀,去除亚细胞成分;再用10,000×g 60min,弃掉上清液,较后所得沉淀既为exosome ,用30ml PBS 溶液重新悬浮沉淀物,混匀后再以10,000×g 60min,用 l ml PBS溶液悬浮沉淀物提纯的exosome 溶液分别装入eppendorf 管内,置于-80℃冰箱内保存备用。外泌体的磷脂双分子层与普通细胞膜具有同源性。广东分析外泌体mRNA测序
云序优势 一站式服务 客户只需提供细胞上清、血清、血浆、外泌体RNA,云序生物提为您完成样品准备,文库制备,上机测序到数据分析的整套服务。 商业化试剂盒抽提外泌体 云序生物使用成熟的商业化试剂盒抽提外泌体,极大改善样品的均一性。客户可选择从外泌体到RNA测序一步流程法,也可选择先提取外泌体,在由外泌体抽取RNA两步流程法。 特异性富集miRNA的片段 特异性富集和检测miRNA,miRNA有效数据高于其它公司提供的常规small RNA测序服务。 专业的生物信息学分析 云序生物具有强大的生物信息学团队,能够满足客户对数据各类深入的分析要求。北京技术外泌体分析外泌体是从母本细胞内部分泌出来,因此会带有母本细胞特定的遗传物质(蛋白、核酸等)。
外泌体(Exosomes)是一种直径在40-100 nm的圆形单层膜结构,是细胞外泌囊泡中体积较小的一种。外泌体可被大多数细胞分泌,并分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液中。外泌体中不仅包含蛋白质成分,还包括一些RNA成分,如微小RNA ( microRNA,miRNA)、长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)、mRNA和环状RNA(circular RNA,circRNA)。环状RNA(circular RNA)是近来新发现的一种非编码RNA分子,研究趋势火爆。环状RNA表达具有组织和疾病特异性,与组织发育、疾病发生 和发展密切相关。此外环状RNA不易降解,可做为新型疾病分子标志物。外泌体环状RNA的研究势必会为疾病诊断与医治带来极大帮助。
超过4 600种蛋白质与外泌体有关。外泌体蛋白有以下几类:①外泌体中常见的蛋白质多与其生物发生机制有关,外泌体含有的细胞质蛋白,如膜蛋白和RAB蛋白,可以促进MVBs与细胞膜的融合及外泌体的释放;Tsg-101及附属蛋白质Alix参与ESCRT过程,促进内体膜的凹陷。②外泌体含有参与抗原呈递的蛋白质,如CD1、MHCⅠ和MHCⅡ,其在免疫调节中发挥重要作用,MHCⅠ还参与向T细胞呈递抗原的生理过程。外泌体表面还存在热休克蛋白,如HSP70和HSP90,促进了抗原肽与MHCⅠ及MHCⅡ的结合。③外泌体含有信号转导蛋白,如G蛋白和蛋白激酶。④外泌体含有丰富的蛋白水解酶,这表明外泌体能够促进细胞转移。⑤外泌体中还含有细胞质微管蛋白、肌动蛋白和肌动蛋白结合蛋白。但目前未发现外泌体中含有与内质网、高尔基体和细胞核相关的蛋白质。外泌体是细胞分泌的大小为40-100nm的盘状囊泡,分布于人体体液。
外泌体的提取方式: 1、离心法:此种方法得到的外泌体量多,但是纯度不足。 2、过滤离心:这种操作简单、省时,不影响外泌体的生物活性,但同样纯度不足。 3、密度梯度离心法:用此种方法分离到的外泌体纯度较高,但是前期准备工作繁杂 4、免疫磁珠法:这种方法可以保证外泌体形态的完整,特异性高、操作简单,但生理性盐浓度会影响外泌体生物活性。 5、色谱法:此种方法分离出的外泌体大小均一,但设备特殊,应用不普遍。外泌体可被大多数细胞分泌,并分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液中。外泌体中不仅包含蛋白质成分,还包括一些RNA成分。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。贵州云序生物外泌体文章
离心法:此种方法得到的外泌体量多,但是纯度不足。广东分析外泌体mRNA测序
LncRNA作为近几年研究火热的非编码RNA,其各种重要功能逐渐被发现,许多与ai症等恶性疾病密切相关。云序生物提供外泌体LncRNA测序,同时分析样品中全部外泌体来源LncRNA和mRNA,我们不仅为客户提供海量数据,更为客户甄别有效数据,提供出版级别经典图片。 一站式服务: 客户只需提供血清、血浆、体液或外泌体RNA,云序生物为您完成从样品准备,文库制备,上机测序到数据分析整套服务流程。专业化的生物信息学分析: 云序生物具有强大的生物信息学团队,能够满足客户的各类深入数据分析要求。广东分析外泌体mRNA测序
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